2023-02-06 12:31:22, 月旭科技 月旭科技(上海)股份有限公司
相信有实验经验的小伙伴都知道,高效液相色谱(HPLC)和超高效液相色谱(UPLC)是实验室常用的组分分离技术。鉴于他们有共同功能,许多小伙伴可能很难区分这两者。下面小编将通过浅谈HPLC和UPLC的区别来带领小伙伴们简单了解两者的差异。
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高效液相色谱定义
高效液相色谱(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支,以液体为流动相,采用高压输液系统,将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱,在柱内各成分被分离后,进入检测器进行检测,从而实现对试样的分析。
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超高效液相色谱定义
超高效液相色谱(Ultra Performance Liquid Chromatography,UPLC)借助于HPLC(高效液相色谱)的理论及原理,涵盖了小颗粒填料、非常低系统体积及快速检测手段等全新技术,增加了分析的通量、灵敏度及色谱峰容量。
(图片来源:包图网)
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超高效液相色谱法的原理与高效液相色谱法
基本相同,所改变的地方有以下几点:
1)小颗粒、高性能微粒固定相的出现。 高效液相色谱的色谱柱,例如常见的十八烷基硅胶键合柱,它的粒径是5μm或者3μm,而超高效液相色谱的色谱柱会达到1.8μm,甚至1.7μm。这样的粒径更加利于物质分离。
2)超高压输液泵的使用。由于使用的色谱柱粒径减小,使用时所产生的压力也自然成倍增大。故液相色谱的输液泵也相应改变成超高压的输液泵。
3)使用低扩散、低交叉污染自动进样器。配备了针内进样探头和压力辅助进样技术。
4)高速采样速度的灵敏检测器。
5)仪器整体系统优化设计。色谱工作站配备了多种软件平台,实现超高效液相分析方法与高效液相分析方法的自动转换。
与传统的HPLC相比,UPLC的速度、灵敏度及分离度分别是HPLC的9倍、3倍及1.7倍,它缩短了分析时间,同时减少了溶剂用量降低了分析成本。
不过由于实验过程中仪器内部压力过大,也会产生相对应的问题。例如泵的使用寿命会相对降低,仪器的连接部位老化速度加快,包括单向阀等部位零件容易出现问题等。
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应用
由于其更高的灵敏度,UPLC可以用于更复杂的样品,并且这些样品中各种成分的量可能更少。一些例子包括膳食补充剂和生物样本。另一方面,高效液相色谱用于相对更简单的应用,例如水的净化和药物中杂质的检测。
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