【新方案】Xevo TQ Absolute高灵敏度分析二甲双胍中的亚硝胺杂质

将每种亚硝胺各5.0 - 10 mg/mL的单标储备液溶于甲醇中，制备含九种亚硝胺(100 μg/mL)的混标溶液。用水连续稀释混标溶液，制备LOD、LOQ和线性标准溶液。

用水制备浓度为20 mg/mL的⼆甲双胍药物样品溶液，然后用0.2 μm/mL的 PVDF针头式过滤器(P/N: WAT200806)进行过滤以备分析。

液相色谱系统： ACQUITY Premier系统

检测条件： MS/MS

样品瓶： LCMS最大回收样品瓶，容积2 mL，P/N: 600000670CV

色谱柱： Atlantis Premier BEH C18 AX (2.1 x 100, 1.7 μm)，P/N: 186009368

流动相A： 含0.1%甲酸和5 mM甲酸铵的水溶液

流动相B： 含0.1%甲酸和5 mM甲酸铵的甲醇溶液

质谱系统：Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪

电离模式：APCI+

采集：MRM模式，如表1所述。

表1. 使用Xevo TQ Absolute串联四极杆质谱仪的MRM通道设置，所有亚硝胺的采集均设置为13点/峰和Auto Dwell（自动驻留）。

⼆甲双胍药物中的定量分析

在MRM采集模式下分析20 mg/mL的⼆甲双胍药物水溶液，检测其中存在的亚硝胺。该方法可以准确测量⾼浓度⼆甲双胍供试品中的亚硝胺杂质。分析⼆甲双胍药物和加标后⼆甲双胍药物样品中亚硝胺(NDMA、NDEA、NMOR和NEIPA)的代表性色谱图如图3所示。⼆甲双胍加标样品中亚硝胺的MS响应和S/N与纯标准溶液中的值相当，表明高浓度⼆甲双胍峰没有离子抑制作用。图3为分析20 mg/mL⼆甲双胍药物(DS)和加标后⼆甲双胍供试品中亚硝胺的代表性色谱图。使用TargetLynx软件，通过对比计算浓度和已知的加标浓度计算出百分比回收率。用⼆甲双胍药物制备的校准标样计算亚硝胺的回收率。⼆甲双胍药物中亚硝胺标准品的标准曲线显示MS响应与浓度呈线性关系，R²≥0.999（图4）。该方法对二甲双胍药物中的所有亚硝胺均表现出优异的准确度（表3）。对于NDMA，0.1 ng/mL和1 ng/mL时的回收率分别为89 - 98%和93 - 98%；对于其他杂质，0.025 ng/mL（或0.00125 ppm，相对于20 mg/mL⼆甲双胍药物）时的回收率为85 - 110%，5个样品的RSD ≤ 6.50%。