梯度洗脱在反相色谱中的作用（下篇）

（图片来源：包图网）

梯度洗脱可用于处理不能以等度洗脱分离的样品，而最常见的使用梯度的因素是多成分保留能力不同，无法在等度洗脱中全洗脱出来，或以等度方式无法达到满意的分离效果。总结下来，以下几种情况，可以采用梯度洗脱：

1、多组分样品的极性范围大，用等度无法全部洗脱的样品；

2、大分子样品；

3、改善峰峰型；

4、目标峰出峰后，短时间内提高有机相比例，洗脱强保留干扰杂质；

5、用等度洗脱无法达到分离的情况。

（点击图片回顾上篇内容）

在检测复杂成分的样品时，往往存在些强保留物质，采用等度，无法把强保留的杂质洗脱下来，一针哪怕采集再久，也会有未知杂质干扰后面进样的效果，这种情况下，可以增加梯度洗脱，使强保留成分在梯度上洗脱出来的方式来解决。

示例：

等度第一、二针，保留时间为19分钟处

的峰没后没有干扰峰

第三针开始，此处出现未知杂质峰干扰，

应为第一针的强保留物质在第三针出峰

30分钟开始，增加梯度洗脱，

以洗去强保留杂质，连续进样，均无干扰

由上面三张图可见，此中药，在采用等度洗脱时，因有强保留未知杂质，连续进样，会在后面的进样出峰，干扰检测。在待测成分出峰后，增加梯度，提高有机相比例，强保留物质在当针就洗脱下来，连续进样确认，效果能完全重现，后面进样不会出现未知干扰峰影响。

有些物质，特别是结构相近的物质，等度条件下无法达到分离，而采用梯度模式，因组分在有机相变化的选择性差异，可以达到分离，这种情况下就需要采用梯度条件进行测试。

示例：

采用等度洗脱，三个物质出了两个峰，

无法使三个成分同时达到分离

采用梯度洗脱，三个物质能完全分离，

满足检测需求

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