Nature综述：巧妙设计增强CAR-T治疗在实体瘤领域的应用

2022-12-14 13:00:55, 义翘神州

前言

CAR-T细胞疗法已成为一种有效的肿瘤治疗方式，但在实体瘤中效果不理想。开发实体瘤CAR-T最大的障碍是大多数候选抗原在非恶性组织上共表达，导致肿瘤外毒性，造成不良反应。今日，美国南加州大学的研究团队在《nature reviews clinical oncology》发表一篇题为“Overcoming on-target, off-tumour toxicity of CAR T cell therapy for solid tumours”的综述文章，结合临床前和临床研究数据，对CAR-T在实体瘤中的毒性及CAR设计进行分析。

CAR的设计在不断发展，用来提高工程T细胞的敏感性、特异性、有效性和持久性。CAR 主要由组成部分：抗原结合域、铰链、跨膜域和细胞内信号域。每部分有不同的功能，组成部件的多样化组合，可以实现 CAR 分子的优化设计。抗原结合域常为单链抗体（scFv)，负责识别并结合靶抗原。铰链和跨膜域可将 scFv 锚定于细胞膜上。CD3ζ是T细胞激活所必需的区域，而共刺激内域，如CD28/4-1BB，与CAR - T细胞增殖、分化和持久性有关。

CAR分子结构

在本文中概述几种已有的更好的限制CAR-T细胞毒性的策略。比如修改CAR的scFv的亲和力使其可以拥有足够的识别肿瘤细胞的亲和力，同时减少对TAA表达有限的非恶性细胞的杀伤力。通过逻辑门控CAR-T细胞，提高细胞杀伤特异性，降低细胞毒性。设置“自杀”开关，在CAR-T细胞中表达一段可诱导的caspase9自杀元件（icaspase9），该元件可以被小分子药物AP1903激活并诱导CAR-T细胞凋亡。

总之，在实体瘤CAR-T细胞的开发应用中，非肿瘤的靶向毒性再所难免。通过各种策略在增加CAR-T细胞效用的同时要限制其副作用。大量的研究集中在开发更具体的CAR系统，包括各种逻辑门控开关、允许外源性控制T细胞功能或存活的系统、调整scFvs的亲和力并改变CAR架构和局部递送CAR-T细胞等策略。

✦ 义翘神州CAR-T开发解决方案

作为一家专注于为全球生物医药领域提供关键试剂和技术服务的高新技术企业，义翘神州特地推出了综合性的CAR-T细胞疗法开发解决方案，全方位地支持客户更方便、更快速地完成从早期靶点发现到临床前研究的每一个阶段。

CAR 开发

义翘神州CAR-T开发解决方案

scFv候选分子开发：scFv抗体库构建平台、Beacon®单B细胞发现平台、流式单B细胞发现平台、杂交瘤开发平台
scFv候选分子筛选：scFv抗体亲和力检测（SPR/BLI）、检测用过表达细胞株构建
靶点蛋白：250+ CAR-T热门靶点蛋白，涵盖荧光标记、生物素标记和无标记形式，高活性，高批间一致性，更接近于天然蛋白结构。
蛋白表达：哺乳动物瞬时表达、杆状病毒-昆虫表达、大肠杆菌蛋白表达、无细胞表达

T 细胞激活

义翘神州CAR-T开发解决方案

CD3单克隆抗体：GMP-10977-H001

Effect of human CD3 (humanized OKT3) antibody on the proliferation and IFN-gamma secretion of CD4+ T cells.

CD28单克隆抗体：GMP-11524-H001

Effect of human CD28 antibody on stimulating IL-2 secretion of CD4+ T cells co-activated with CD3 antibody.

慢病毒包装

义翘神州CAR-T开发解决方案

无血清细胞培养基及补料液
SMM 293-CD1 培养基（货号：M293CD1）

相同条件下，使用SMM 293-CD1培养基，HEK293F细胞密度更好。

多款现货无血清、无动物源的HEK293培养基

货号	名称	应用
M293TII	SMM 293-TII培养基	新一代产品，HEK293细胞悬浮培养、蛋白瞬时表达、慢病毒包装
M293TI	SMM 293-TI培养基	原代产品，HEK293细胞悬浮培养、蛋白瞬时表达、慢病毒包装
M293-SUPI	SMS 293-SUPI加料液	支持悬浮类型细胞生长

细胞转染试剂

义翘神州拥有高品质的转染试剂 Sinofection® Transfection Reagent（Cat#: STF02），细胞毒性小、重复性高，可用于慢病毒载体的高效转染，转染效率基本可以达到95%以上

GMP级核酸酶

义翘神州提供GMP级条件下生产的全能核酸酶Super Nuclease（Cat#: GMP-SSNP01），无动物源性，可高效降解单链、双链、线性、环状、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性，应用场景广泛且使用量低不易残留，质量、性能、供货能力可靠，并已完成在FDA的药物主文件申报备案（DMF Number#:35978），满足药物申报的需求。

相同条件下，不同用量的GMP级全能核酸酶和其他品牌核酸酶对鲑鱼精DNA 的降解效率相当

细胞库检测
义翘神州遵循NMPA、FDA、EMA、ICH等多个国内外法规和指导原则，建立了全面的细胞库测定方法，助力于CAR-T细胞治疗的安全性，主要包括以下几个检测方面：无菌检查、支原体检查、内外源病毒污染检查、成瘤性检查等。
慢病毒包装质粒生产
义翘神州升级改造后的慢病毒质粒制备平台，采用GMP级别的生产线，对过程和最终产品的严格管控，确保了最终产品质量符合客户需求。义翘神州可以提供从μg级别，mg级别至g级别不同规模的科研级质粒生产服务，满足不同的需求。

CAR-T 细胞扩增

义翘神州CAR-T开发解决方案

更规范的GMP级质量管理体系、文件齐全的质量保证管理体系、更稳定质量控制体系、更安全的产品安全性检测体系：四大体系造就高品质GMP级细胞因子，保障CAR-T开发！

以GMP-IL21产品为例

高纯度：SDS-PAGE和SEC-HPLC高于95%

高批间一致性

高稳定性

GMP级别CAR-T培养专用细胞因子
货号	靶点	内毒素	纯度及活性
GMP-11848-HNAE	IL-2	< 0.005 EU/μg	≥95%，Active
GMP-11821-HNAE	IL-7	< 0.01 EU/μg	≥95%，Active
GMP-10360-HNAE	IL-15	< 0.01 EU/μg	≥95%，Active
GMP-10584-HNAE	IL-21	< 0.005 EU/μg	≥95%，Active

CAR-T 细胞质量控制

义翘神州CAR-T开发解决方案

CAR-T细胞纯度检测

检测项目	检测目的	义翘神州解决方案
活细胞比例	检测活细胞比例	Annexin V/7-AAD凋亡检测试剂盒（Cat#: APK10448-F；Cat#: APK10448-P）
细胞群或亚群比例	监测CAR-T细胞的分化、耗竭、凋亡等	丰富的流式抗体产品
目的细胞比例	了解CAR-T细胞产品活性的关键特征	靶点蛋白、Protein L、抗独特型抗体制备服务
非目的细胞比例	检测残留的肿瘤细胞比例	涵盖CD19、CD20、CD22、EGFR、CD3等血液肿瘤和实体瘤热门靶点
杂质	检测细胞因子残留	IL-2 ELISA试剂盒（Cat#: KIT11848）、IL-7 ELISA试剂盒（Cat#: KIT11821）