重磅！无菌检测详细教程来了，文末有福利！

无菌的医药产品，不仅包括直接注射到人体的药物比如疫苗，也包括原辅料、眼药水、无菌医疗器械等。常见的无菌产品剂型为：液体或粉末、药膏或油状，固体形态，悬浮液和乳液等，这些产品在最终放行前都必须要测试微生物污染的状况。

无菌检验原理是基于“薄膜过滤”的方法，它可以把微生物从各种样品中富集，同时经过冲洗去除、中和抑制物质，灌入TSB、FTM培养基，经过 14 天的培养，并观察样本在不同培养基内浊度：无浑浊意味着通过无菌检查！

那么，为了避免出现假阴性或者假阳性的情况，你需要关注实验流程中的每一个细节，包括操作风险、取样数量风险、A级环境维持和监测风险、SOP方法验证、培养基的适用性检查、仪器设备的自身风险、实验用耗材的风险控制、结果判定的风险等。那么，

下面我们就来详细解答一下这些常见的问题

• 培养基不合格

• 方法有效性问题，未完全去除抑制物

• 无菌检测设备的物理杀伤：如设备剪切力，发热影响

• 无菌滤筒滤膜未能完全截留微生物或者滤膜破裂

• VHP灭菌后，无菌滤筒中有消毒剂残留

• 无菌滤筒本身含有少量化学抑制剂

• 无菌滤筒的换气滤器破损或者产生大量气泡

首先选择具有几乎 100 %截留率的采样方法，比如凝胶膜过滤法。其次要减少人员和设备本身的影响，因此采样设备必须和采样头分开放置，只有采样头部分在A级区域内，并通过 0.2 um的空气滤芯隔离A级区与外部，整个系统必须耐受VHP在线灭菌循环。采样头、培养基必须是多层无菌包装，防止A级区消毒过程中的消毒剂残留，避免假阴性结果。

很多用户喜欢使用GMF凝胶膜进行A、B级区域浮游菌监测，因为它可以连续采样 8 小时，而不用担心凝胶膜失水的问题；对细菌和病毒都具有 99.9 %以上的截留率，无菌操作结束后，将凝胶膜转至培养基，滤膜会融化消失。因为是连续的等流速采样，如果未检出细菌，即可证明环境内无菌。

用于无菌检测的设备应该易清洁，没有不锈钢或者塑料的残留死角，耐受所有可能用到的消毒方式，同时运行稳定，运行时不产热，能够均匀分配 2 ml - 200 ml 液体，能够记录SOP程序和原始检测数据，便于溯源。在B+A级洁净区使用的集菌设备不能有排风扇，否则会导致操作时环境监测不合格。

无菌检测滤筒是无菌实验中非常重要的一环，选用不当可能会导致假阳性或者假阴性结果，合格的无菌滤筒应当提供COA证书和验证报告，并对各项风险因素测试合格，以下参数亦可用于验收无菌滤筒。

滤筒的无菌性测试

滤膜的截留率

促生长测试

滤膜完整性测试

包装的气密性测试

滤筒呼吸器的完整性测试

滤筒的破裂压力测试

阳性对照目的在于防止假阴性，首先要确认供试品在目前的实验、培养条件、SOP方法下不存在抑菌作用，比如冲洗、中和方法；另外也要考虑过滤设备剪切力、产热等影响因素。

考虑到交叉污染的风险，你需要在专用的阳性菌检测室操作，根据供试品特性选择对应阳性对照菌：

按照供试品检验流程，在缓冲液内加入阳性菌，接菌量<100cfu，经过检验设备的转移进入无菌滤筒，培养48～72小时应生长良好，可有效避免因操作、设备物理作用导致的假阴性风险。

A级区域浮游菌监测

GMF 凝胶滤膜三层无菌包装，即取即用，可以长达8小时连续进行空气中微生物和病毒的监测，经过验证，细菌截留率 99.9995 %，T3 噬菌体病毒截留率 99.94 %。

无菌设备与耗材

无菌检测设备采用模块化设计，易清洁，表面无死角，不产热，能够红外扫描存储原始数据和SOP 程序，最大限度降低设备对实验结果的影响。独有的无菌取样隔膜，可以用于向滤筒内无菌添加物质或者培养过程中的无菌取样。

快速微生物检测试剂盒

对于需要快速了解样品微生物状态的需求，可以在培养几天后通过无菌取样隔膜取样并通过ATP生物发光、呼吸法和核酸扩增等快速检测方法的进行检测，也可以直接把样品通过PCR的方式进行微生物检测。赛多利斯提供符合欧洲药典验证标准的基于qPCR方法的快速微生物检测试剂盒，可以在3个小时内进行包括细菌、真菌和支原体的检测。

  文末福利来了！

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