【极限原创】Welchrom-C18检测饲料中三聚氰胺

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三聚氰胺，简称三胺，分子式C₃N₆H₆，是一种重要的氮杂环有机化工原料。由于三聚氰胺分子中含有大量氮元素，而普通的全氮测定法测饲料和食品中的蛋白质含量时不能排除这类假蛋白氮的干扰，因而一些厂商为了能降低成本而添加这种化工原料，以提高产品中蛋白质含量。长期或反复大量摄入三聚氰胺可能对肾与膀胱产生影响，导致产生结石。奶粉中相继查出含大量的三聚氰胺，故测定饲料中是否含有三聚氰胺，具有重大意义。

1、主要仪器和试剂

高速离心机(10000r/min)；

超声波震荡仪；

涡旋混合器；

分析天平（万分之一）；

溶剂过滤器（带0.45μm有机、水系过滤膜和真空泵）；

乙腈（HPLC级）；

三聚氰胺（≥99.0%）；

三氯乙酸（优级纯）；

柠檬酸（分析纯）；

辛烷磺酸钠（色谱级）；

水（二次蒸馏水以上）；

2、三聚氰胺提取

称取2g（精确至0.01g）粉碎试样于50mL具塞塑料离心管中，加入15mL1%三氯乙酸和5mL乙腈，超声提取10min，再振荡提取10min后，以不低于4000r/min离心10min，上清液经三氯乙酸溶液润湿的滤纸过滤后，用三氯乙酸溶液定容至25mL，移取5mL滤液，加入5mL水，混匀后待净化液。

3、 净化步骤净化
SPE柱：月旭Welchrom P-SCX固相萃取柱（60mg/3mL）；Part NO: WSS46180101
a)活化：依次加入3mL甲醇、5mL水活化，流出液弃去；
b)上样：将提取液加入月旭Welchrom P-SCX柱中，流出液弃去；
c)淋洗：依次用3mL水、3mL甲醇淋洗，淋洗液弃去；
d)洗脱：用6mL 5%氨水-甲醇溶液洗脱，收集洗脱液；
e)浓缩：用氮气或者水浴蒸发至干，残留物用1mL流动相定容，涡旋混合1min，过微孔滤膜后，供HPLC分析；

注：整个固相萃取全过程采用的自然重力流速过柱，不需要加压也不需要抽真空。

4、色谱条件色谱柱：

色谱柱：Welchrom-C18(250mm×4.6mm 5μm ); Serial Number：W13212257；
流动相：乙腈：10mM/L柠檬酸+10mM/L辛烷磺酸钠缓冲液=10：90（pH=3.0）

流速：1.0mL/min
进样量：10μL
柱温：40 ℃

检测波长：240nm

三聚氰胺标液色谱图

工作曲线：

样品测定数据：

图3 某样品的色谱图
加标回收率：

结论：采用月旭Welchrom P-SCX固相萃取净化柱（60mg/3mL）及月旭Ultimate XB-C8（4.6 x 250mm, 5μm）色谱柱测定饲料中的三聚氰胺，具有检测灵敏度高、精密度高、准确度高、线性范围好和回收率高等优点，完全符合分析要求，适合各类饲料中三聚氰胺的快速检测。

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