牛奶中四环素类抗生素检测的操作步骤

牛奶中为什么会出现四环素呢？原来，四环素类抗生素，因为用于奶牛的消炎治疗，然后会有残留，在牛奶中有少量药物的存在。因此，牛奶中的四环素类抗生素的检测显得尤为重要！

4、试剂:

试剂1：磷酸氢二钠 0.2mol/L：称取十二水合磷酸氢二钠 71.63g，加水溶解，稀释到 1000mL。

试剂2：柠檬酸 0.1mol/L：称取柠檬酸单水合物 21.04g，加水溶解，稀释到 1000mL。

试剂3：移取 625mL 试剂1 与 1000mL 试剂2，混匀。

试剂4：0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine：称取 60.5g 乙二胺四乙酸(EDTA)二钠盐，用试剂3 溶解并混匀。用 0.1mol/L 的 HCl 或 NaOH，调节 pH 至 4.0±0.05，4℃ 保存。

提取液： Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液：甲醇=(9:1)。

5、提取步骤:

称取 5g 牛奶样品，加入 20mL 提取液，涡旋混合 1min，常温超声 10min，4000r/min 离心 10min，将上清液转移到 50mL 的容量瓶中，再分别用 15mL、10mL 提取液重复上述提取操作，合并上清液，并用提取液定容到 50mL，转移到离心管中，待净化。

7、注意事项:

(1) 标准是用 0.1mol/L Na2EDTA-Mcllvaine 进行提取的，但实验效果不佳，后改成 Na2EDTA-Mcllvaine 缓冲液：甲醇=(9:1)。

(2) 在过 SPE 小柱的过程中，“活化”和“上样”这两个步骤要注意不要使得小柱干涸，这样会影响小柱的回收率。而在“淋洗”步骤一定要抽干，因为乙酸乙酯和水是不互溶的。

(3) 加标过程：样品的加标量分别为 2mg/kg，1mg/kg，往 5g 牛奶加入 1mL 10µg/mL 和 0.5mL 10µg/mL 混标溶液，然后用提取液提取，最后用 Na2EDTA-Mallvaine 缓冲液定容至 50mL，准确移取 5mL 上固相萃取柱净化，最终定容到 1mL。

9、色谱图或者加标回收率结果：

图1：牛奶样品色谱图

图2：对照品 0.5 μg/mL 色谱图

图3：牛奶样品加标 1mg/kg 图谱

图4：对照品 1 μg/mL 色谱图

图5：牛奶样品加标 2mg/kg 图谱

表1：加标回收率测定结果

由表1 可知，采用固相萃取结合高效液相色谱检测四种四环素类药物，加标量为 1.0mg/kg、2.0mg/kg，回收率为 82%~111%，能够满足检测要求。

由图1-5 可看出经 Welchrom® BRP 固相萃取柱净化，采用 Ultimate®Plus-C18 色谱柱检测能够使四种四环素药物得到良好的分离，且各种物质峰形良好，保留时间稳定。

10、相关产品信息：

货号

名称

规格

00522-20014

Welchrom®BRP

200mg/6mL，30pk

00000-30013

15mL螺口尖底离心管

100支/包

00000-30016

50mL螺口尖底离心管

50支/包

00824-31001

Welch 固相萃取装置

12位方缸

00802-02201

针头式过滤器 Nylon

13*0.22 100pk

00824-11101

一次性注射器

200pk/盒 带针头 橡胶头 1ml

00821-32291

盖子+垫片

预切口红色特氟龙/白色硅胶隔垫，9mm蓝色短螺纹开口盖 中心孔6mm 

00821-40927

样品瓶

2ml 透明短螺纹广口样品瓶 带书写处11.6*32mm  一级水解玻璃

00260-31043

Ultimate®Plus-C18

4.6 x 250 mm, 5 μm

00826-T156P250

盐酸四环素标准品

CAS No.:64-75-5, 250mg

00826-C162P250

盐酸金霉素标准品

CAS No.:64-72-2, 250mg

00826-O024P250

盐酸土霉素标准品

CAS No.:2058-46-0, 250mg

00826-D428P100

盐酸强力霉素(盐酸多西环素)标准品

CAS No.:24390-14-5, 100mg

心服务，新起点，致极限。

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400-810-6969

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www.welchmat.com

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