2022-11-08 17:56:13, 西湖欧米wOmics
图1 文章标题
实验样本及设计
(2)前哨淋巴结:3个正常前哨,4例I级,8个II级,4个III级。
图2 该研究采用的空间蛋白组学分析流程(根据IHC染色结果获取感兴趣区域进行质谱检测)
文章结果
01
SLN 的蛋白质组学特征
在24个前哨节点样本中(正常和I-III级),鉴定到1291种蛋白质的表达水平存在显著差异,其中包含62种特异性表达蛋白质:正常组3种,I级21种,II级5种,III级33种。研究进一步通过多样本比较分析,发现共有336种蛋白质在四组样本中表达存在显著差异,并通过基因集富集分析(GSEA)四个聚类类别的蛋白细胞生物学功能。
图3 SLN 的蛋白质组学分析
02
EC的蛋白组学特征
研究在12个内膜样本中(正常和 I-III 级),共鉴定到1280种蛋白质在表达水平上显示显著差异。其中11种蛋白质在健康内膜组织中具有特异性,I 级中有24种,II级中有14种,III 级中有19种。主成分分析(PCAs)和热图聚类分析揭示了健康内膜和 EC 之间的差异性。GSEA 分析发现,EC 中上调的蛋白质参与翻译、转录和核苷酸代谢。
图4 EC 中的蛋白质组学分析
分层聚类和热图表示在三个 EC 等级之间建立了良好的区分。I 级肿瘤中过表达的蛋白质,有30种参与免疫应答,例如γ干扰素诱导蛋白16(IFI16),溶菌酶C,髓过氧化物酶和乳转移铁蛋白。对于 II 级,有42个与细胞骨架蛋白结合,核糖体和肌动蛋白结合有关的蛋白质。鉴定出一个涉及 TPM4、TPM2、TPM1、MYH10 和 MYH11 的网络,类似于最近在胶质瘤中发现的网络。对于 III 级,一些蛋白质参与细胞粘附和细胞外基质,包括 ApoE 和 HSPG2。同时,分别在 I 级和 II 级肿瘤中鉴定出 PTX3 和 ASS1 过表达。根据 TCGA 数据和基于抗体的蛋白质数据,这两种蛋白质被认为是前20大最不利的预后因素之一。
图5 I-III 级 EC 中的蛋白质组学分析
03
SLN 和 EC 之间的蛋白组学比较
为进行 SLN 和 EC 之间的比较,将两种样本类型的蛋白组数据放在一起进行了分层聚类和热图展示,结果显示 SLN-I 和 EC-I 样本进行了组合,EC-II 和EC-III 也与 SLN-II 和 SLN-III 重组和分离。Cluster 1 对应 SLN-I 和 EC-I 中过表达的蛋白质,Cluster 2 代表 SLN-III 和 EC-III 过表达的蛋白质。Cluster 1 中包含22中蛋白参与免疫应答,其中包含10种抗菌肽、MNDA、SerpinB1、ITGB2、ITGA6 和 ANXA1 等都是对预后有利的蛋白。Cluster 2 中多包含不利于预后的标志物,如 ALDH2、PRSS3、YBX1、SLC1A5、ALDOA、ATP1A1 和 UBA2 等。
图6 I-III 级 SLN 和 I-III 级 EC 之间差异表达蛋白质的分层聚类
进一步,使用相关矩阵展现了在 SLN 和 EC 不同等级中特定表达的蛋白质。并且与 TCGA 中发现的选定标志物进行了对比分析。
图7 矩阵分析和 TCGA 中发现的选定标志物的对比展示
04
SLN 和 EC 中标志物蛋白的靶向验证
该研究通过蛋白组学分析建立了 SLN 和 EC 组织之间常见的分级依赖性标志物(RSS3、PTX3 、ASS1、ALDH2 和 ANXA1)。为确认蛋白组学结果研究团队进一步进行了免疫荧光进行检测验证。结果显示,在 EC 样本中,PRSS 更多的表达在 III 级,ASS1 在 II 级,PTX3 和 ANXA1 在 I 级,ALDH2 则在 II 级和 III 级中均有表达;在 SLN 样本中,ASS1、PTX3 和 PRSS3 在 I 级中具有高度表达,而在 II 级和 III 级中表达量较低。PRSS3 在 II 级中可检出性较低,而在 III 级中检出率较高。对于 PTX3,在 II 级和 III 级中的检测水平低于 I 级和健康对照样本。同时,还检测了一些 TCGA 中分析出的蛋白标志物 CD74、GOLM1、SLC9A3R2 和 SP100。
另外,该研究利用人类数据库与 XMan v.2 数据库结合使用鉴定出66种肿瘤突变肽。同时鉴定出36种可能来自非编码 RNA(ncRNA)翻译的蛋白质。
图8 已确定标志物的免疫荧光验证
原文链接:doi: 10.1016/j.xcrm.2021.100318.
编译:周承
审校:江燕、刘晶晶
西湖欧米空间蛋白学
西湖欧米现推出ProteomEx空间蛋白组,通过使用膨胀水凝胶技术结合各类不同的组织样本,联合高分辨成像技术和高灵敏度质谱技术,为客户带来高品质的空间蛋白组服务。该技术可应用于微环境与疾病发展、机制与药物靶点、器官结构异质性以及组织器官空间图谱等研究方面,助力探索空间维度上的蛋白质信息。
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