困扰你的蛋白表达难题，退！退！退！

二硫键在分泌蛋白和膜蛋白的细胞外结构域的形成中起重要作用，它们对蛋白的功能表达至关重要。在真核生物中，多肽合成发生在细胞质的还原环境中，而二硫键则在内质网（ER）的氧化环境中形成。但是CFS中的蛋白合成通常在还原条件下进行，因此在CFS中引入了参与真核生物二硫键形成的酶——蛋白二硫键异构酶 (PDI) 和 ER 氧化还原酶 1α (Ero1α)。

使用CFS系统合成了抗 AGIA-IgG（兔）的 Fab 片段。Fab 片段除了有三个重 (H) 链和三个轻 (L) 链中的二硫键外，还包含重链和轻 (H-L) 链之间的二硫键。此外，几个脯氨酸残基以顺式形式形成肽键。图中是兔 IgG-Rab 片段结构和二硫键位置。 

使用CFS系统合成了与溶栓有关的组织纤溶酶原激活剂 (tPA) 的蛋白酶结构域（氨基酸残基 297；六个二硫键）。当使用不含 DTT的底物时蛋白溶解度增加了380%。图中是蛋白双层合成条件。

为了开发抗病毒感染的新药，了解病毒生长和毒力的机制非常重要。病毒编码的酶常用于靶向治疗。然而，由于不溶性，使用传统的大肠杆菌或昆虫细胞系统提取有活性蛋白可能很困难。使用CFS可以在体外合成逆转录酶和 HIV-1 整合酶蛋白。

CFS有共表达能力，细胞内信号调节因子SOCS1的表达被认为是在HIV感染细胞中诱导的，对艾滋病的研究有重要的意义。除此之外CFS还可以高通量制备E3连接酶。

CFS合成了包括 SOCS1 在内的四种蛋白组成的泛素连接酶复合物（E3 复合物）。  

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