困扰你的蛋白表达难题,退!退!退!

2022-10-28 02:05:42, TIANGEN


一入生科深似海,从此蛋白是路人。“表达蛋白”是多少实验室童鞋们的痛,每每听ta们讲述实验中的惨痛经历,我在揪心的同时也仿佛看到了曾经的自己!

如今,应用于科研领域的蛋白表达技术已经有了飞跃性的发展,只需要像PCR那样配制好表达体系,就能在两天内获得令你满意的功能蛋白,它再也不是困扰科研人的一个难题啦! 

Cell-Free System(CFS)

无细胞蛋白表达系统

CFS利用麦胚提取物,人工提供蛋白表达所需的酶、辅助因子,并模拟表达环境,仅使用PCR片段或载体为模板,即可在反应体系中通过双层液相反应法(Bilayer Reaction Method) 进行蛋白表达。

广泛适应

这是一个可以表达多种物种(包括真核生物、原核生物和病毒)蛋白的系统。

快捷简便

即使你以前从未表达过蛋白,也很容易上手。整个过程仅需四步,省去培养细胞的麻烦,节约大量时间。成功构建模板DNA后,只需一支移液器和一个培养箱,进行简单的配液操作,就能在两天后获得目的蛋白。

高产高质

这是一种强大的蛋白合成技术,那些难以加工的蛋白, 它都可以表达:

• 毒蛋白/受细胞环境影响的蛋白

• 共表达蛋白/高通量表达蛋白

• 膜蛋白/转录因子(可通过添加辅助因子、金属离子、添加剂等提高蛋白活性)

CFS系统比其他蛋白表达系统

具有更高的表达率和溶解度

通过CFS系统可以获得更高产量

相比于传统蛋白表达系统,CFS无细胞蛋白表达系统,在各个方面均表现出明显优势,为蛋白表达研究的高效进行,提供了可能。

困难蛋白表达实例 

含二硫键蛋白的合成

二硫键在分泌蛋白和膜蛋白的细胞外结构域的形成中起重要作用,它们对蛋白的功能表达至关重要。在真核生物中,多肽合成发生在细胞质的还原环境中,而二硫键则在内质网(ER)的氧化环境中形成。但是CFS中的蛋白合成通常在还原条件下进行,因此在CFS中引入了参与真核生物二硫键形成的酶——蛋白二硫键异构酶 (PDI) 和 ER 氧化还原酶 1α (Ero1α)。

使用CFS系统合成了抗 AGIA-IgG(兔)的 Fab 片段。Fab 片段除了有三个重 (H) 链和三个轻 (L) 链中的二硫键外,还包含重链和轻 (H-L) 链之间的二硫键。此外,几个脯氨酸残基以顺式形式形成肽键。图中是兔 IgG-Rab 片段结构和二硫键位置。 

使用CFS系统合成了与溶栓有关的组织纤溶酶原激活剂 (tPA) 的蛋白酶结构域(氨基酸残基 297;六个二硫键)。当使用不含 DTT的底物时蛋白溶解度增加了380%。图中是蛋白双层合成条件。

病毒酶蛋白的合成与活性测定

为了开发抗病毒感染的新药,了解病毒生长和毒力的机制非常重要。病毒编码的酶常用于靶向治疗。然而,由于不溶性,使用传统的大肠杆菌或昆虫细胞系统提取有活性蛋白可能很困难。使用CFS可以在体外合成逆转录酶和 HIV-1 整合酶蛋白。

应用于蛋白复合物合成

CFS有共表达能力,细胞内信号调节因子SOCS1的表达被认为是在HIV感染细胞中诱导的,对艾滋病的研究有重要的意义。除此之外CFS还可以高通量制备E3连接酶。

CFS合成了包括 SOCS1 在内的四种蛋白组成的泛素连接酶复合物(E3 复合物)。  

CFS无细胞蛋白表达系列产品选购指南  

免费试用,反馈有礼

试用产品

CFS一步法快速小量蛋白表达试剂

Premium ONE Expression Kit

产品规格:6rxn

活动规则

• 免费试用:11月30日前,每个实验室可通过下方入口申请1个试用装(共20份),数量有限,先到先得。

• 反馈有礼:成功申请者反馈试用结果,还可获得乐扣保温杯或萌象抱枕被1个!

申请免费试用


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