直播预约丨从体外到活体转染 核酸递送方法全解析

2022-09-22 20:48:06, polyplus


转染是细胞生物学常用的试验技术,通过将外源核酸导入细胞,进行蛋白表达和基因功能研究,是研究细胞和动物模型的重要工具。




你知道的转染方式有哪些?
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1)物理方式
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2)生物方式
病毒感染:需要专业技术和特定生物安全等级的实验室

3)化学方式
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常用的化学方式有磷酸钙共沉淀,脂质体和阳离子聚合物(如上图)
化学转染是最简单的细胞转染方法,具有高效、操作简单、重复性好,成本低的特点



阳离子聚合物PEI
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PEI:Polyethylenimine (聚乙烯亚胺)
由著名化学家Dr. Jean-Paul Beh发明并申请了专利,他和他的团队基于这个专利创立了Polyplus公司

PEI是如何把核酸递送到细胞内的?


PEI带正电,可以包裹带负电荷的核酸,形成核酸-聚合物的复合物,在静电作用下贴附在细胞膜上,然后通过内吞作用进入细胞。随后经质子海绵作用,内涵体在细胞质中释放DNA。当有丝分裂过程中核膜消失时,质粒大多到达细胞核。PEI转染对细胞的毒性更小,因为不会改变膜的通透性,能够维持细胞良好的状态。通过在大量细胞上的验证,PEI具有卓越的转染效率。

除了转染效率高,细胞活率高,PEI用作转染试剂还有更多的优点
1)可以兼容血清和抗生素,转染前后不用换液
2)操作更加便捷
3) 经济高效,质粒用量和转染试剂用量小



全面的转染解决方案

Polyplus位于法国斯特拉斯堡,成立于 2001, 基于PEI转染专利

拥有超过20年的核酸转染经验,Polyplus-transfection®的产品线覆盖了生命科学研究,生物制品制造,基因和细胞治疗以及活体转染; 专业的技术和法规团队,为客户带来全方位的支持。

在生命科学研究领域,我们也提供了全面的转染试剂,满足您多样化的转染需求


推荐
01
通用型DNA/siRNA转染试剂jetPRIME®
02
用于难转染细胞的jetOPTIMUS®
03
siRNA/miRNA转染试剂INTERFERin®
04
mRNA转染试剂 jetMESSENGER®
05
活体转染试剂 in vivo jetPEI®
06
mRNA活体转染试剂 in vivo jetRNA®



明星产品 jetPRIME® 高效转染试剂 基于阳离子聚合物

更高效的转染效率比脂质体转染效率更高
根据说明书推荐步骤转染,GFP质粒转染后24小时FACS结果

操作步骤简单,可以兼容血清和抗生素,转染前后不用换液


性价比高 质粒用量和转染试剂用量小


把大象放进冰箱只需要一步:打电话叫来jetPRIME




jetOPTIMUS®: 最佳的DNA转染试剂

通常,贴壁细胞(如肿瘤细胞系等)比悬浮细胞(如淋巴细胞等)容易转染;增殖速度快的细胞比处于静止期的细胞容易转染;而细胞系比原代细胞更易转染。

为了提高转染效率,Polyplus开发了最新代DNA转染试剂jetOPTIMUS® 针对各种难转染原代细胞和细胞系,如干细胞,原代细胞,神经细胞及iPSC等,都能达到很高的转染效率; 提高转染效率的同时,jetOPTIMUS®还具有高性价比,使用更少量的转染试剂和DNA

转染效率极高 优于主要的竞争者

按照标准操作手册 在几种细胞系上进行转染

更少的转染试剂和DNA用量


同样,基于阳离子聚合物 jetOPTIMUS®还具有毒性小、细胞活率高和操作方便兼容血清抗生素,转染前后无需换液等优点


非常温和 能够保持良好的细胞活率和细胞形态

按照标准操作手册 在Vero细胞上进行转染


更多jetOPTIMUS®在神经细胞和干细胞中的案例分析, 请阅读干细胞和神经细胞转染利器|且看jetOPTIMUS如何解决难转染细胞问题干细胞转染利刃:jetOPTIMUS®轻松解决难转染细胞问题




INTERFERin®  更少的siRNA,更少的脱靶效应

一些文献表明转染低浓度的siRNA能够避免脱靶效应。确实,当转染高浓度siRNA时,会观察到这些非特异性的副作用。因此通过使用尽可能少的siRNA可以提高实验数据的可靠性。INTERFERin® 专为此而设计:使用低浓度siRNA达到高效率基因沉默。


使用INTERFERin®递送1 nM siRNA 就可以达到具有选择性的高效基因沉默,而竞争产品需要至少10 nM siRNA来达到50%的基因沉默 (Fig. 1).


Fig. 1: INTERFERin® 仅需要1 nM siRNA达到有效的基因沉默


更加令人惊叹的是, 使用10 pM siRNA 依然能达到50%的沉默效率 (Fig. 2).

Fig. 2. INTERFERin®在极低的 siRNA 浓度下也能达到高效基因沉默。A549-GL3Luc cells 在有血清的条件下使用INTERFERin® 转染浓度逐步降低的 anti-Luc siRNA. 48小时后检测Luciferase的表达. control siRNA没有观察到抑制效果


对多数贴壁细胞或原代细胞,1 nM siRNA能够达到超过90%的基因沉默。对于悬浮细胞,使用5 nM siRNA依然能达到80%的沉默效率。


Table 1: 成功使用INTERFERin®达到高效基因沉默的细胞系


在保持细胞活率方面,INTERFERin®优于其他转染试剂,能够保持极佳的细胞活率。我们提供简单即用的标准操作说明书,1nM的起始用量在大多数细胞中可达到有效的基因沉默。更多详情请阅读1nM? 10pM? siRNA高效基因沉默 更少用量 更少脱靶效应




mRNA转染试剂jetMESSENGER®

DNA转染要穿过两层屏障,而mRNA转染只需要穿过一层屏障,不需要穿过核膜,对细胞比较温和;且mRNA输送无需进入细胞核,与DNA转染相比,消除了基因组整合的风险。


DNA 转染 = 2层屏障 ,mRNA 转染 = 1层屏障


对于原代细胞,神经细胞等比较难转染的细胞,使用jetMESSENGER®转染mRNA能够达到比较高的转染效率。


jetMESSENGER® 用于难转染细胞的mRNA转染,效率高于主要的DNA转染试剂

Fig. 1. jetMESSENGER® 转染效率优于主要的DNA转染试剂竞争者。按照厂商建议条件在不同细胞中转染编码eGFP的mRNA  (5meC, pseudo-uridine, Trilink™) 或DNA。转染24小时后用FACS检测转染效率。


jetMESSENGER® 在难转染细胞中非常高效,相比于其他mRNA转染试剂


Fig. 2. jetMESSENGER®相比主要竞争者有更高的转染效率。在不同的难转染细胞系中按照厂家建议条件使用 jetMESSENGER® or Lipofectamine® MessengerMAX™转染eGFP mRNA (5meC, pseudo-uridine, Trilink™)。转染后24小时用FACS检测转染效率。


更多相关信息,请阅读干细胞和神经细胞转染利器|且看jetOPTIMUS如何解决难转染细胞问题




活体转染试剂 in vivo jetPEI®

在体内进行核酸递送可使用病毒载体和非病毒转染方法。病毒载体的递送效率比较高且具有靶向性;但是使用病毒载体会引起一定的免疫反应,并且病毒载体生产周期较长,成本较高。


使用非病毒方法进行体内核酸递送具有以下优点

  • 更加安全

  • 性价比更高

  • 使用便捷


这里我们给大家介绍两款活体转染试剂,适用于任何动物模型的核酸转染,操作简便,仅需两个步骤。可满足处于各个阶段的客户,包括从科学研究,到初期的工艺开发,临床前研究以及临床试验和商业化。可用于基因治疗和疫苗。



拥有大量成功经验,可以安全有效地在任何动物模型中递送各种核酸类型,in vivo-jetPEI® 是最先进的活体转染试剂。有超过700篇参考文献,已经被用作几个药物开发项目的递送载体。正在进行的几项用于癌症治疗,疫苗和免疫的临床试验使用最高质量的GMP级 in vivo - jetPEI®

多元化: 可用于任何动物模型和DNA, si/miRNA及其他各种核酸类型

in vivo-jetPEI® 可在任何器官或组织中,通过基因过表达或者基因抑制的方法进行基因功能研究。它可以通过全身和局部注射目标多种器官。注射途径在很大程度上决定了靶器官。例如,在静脉注射时, in vivo-jetPEI®递送的 DNA 主要在肺部表达,也在肝脏、胰腺、肾脏、脾脏、膀胱、心脏和动脉中表达。而腹腔注射,基因在卵巢、胰腺、膈肌、子宫和胃中表达 (Fig. 1)。为了实现器官特异性基因表达,可以结合细胞特异性启动子和局部注射途径,达到在特定器官/组织中的基因表达。


Fig. 1: 小鼠中使用in vivo-jetPEI®通过全身注射进行核酸递送的靶向器官


使用便捷:两步法操作

in vivo-jetPEI®使用便捷,和体外转染类似,核酸和in vivo-jetPEI®混合后,直接注射到动物体内(Fig. 2)。


Fig 2: in vivo-jetPEI® protocol in mice


质量等级

in vivo-jetPEI®有研发级用于基础研究和实验验证,PC级可用于临床前生物分布和毒理研究,GMP级 in vivo-jetPEI®是最高质量等级的,符合人体临床试验的质量要求。





mRNA活体递送试剂 in vivo jetRNA®

体内转染试剂是一种有效的,非病毒载体的核酸递送试剂。它们易于使用,性价比高,被认为是RNA递送的安全和高效的载体。mRNA转染正迅速发展成为一种有前景的核酸治疗方法。非病毒mRNA递送方法已经证明了在疫苗和癌症治疗方面的高效性。

Polyplus开发出一种用于体内递送mRNA的转染试剂 — in vivo-jetRNA®。该试剂可以通过全身或局部注射,在不同的动物模型中目标多种器官。通过in vivo-jetRNA®递送mRNA仅需两个步骤,可用于疫苗接种、抗癌研究、CRISPR/Cas基因编辑及蛋白替换等多个领域。


In vivo-jetRNA®能保护其有效荷载免受无处不在的核酸内切酶降解,防止与蛋白质的非特异性相互作用,并促进有效的进入细胞,这让其成为使用不同给药途径将mRNA递送至各器官的首选试剂。它介导的mRNA递送可通过腹腔注射在多个器官中表达,尤其是在免疫反应中起主要作用的脾脏和淋巴结,以及肝脏、胰腺和子宫等其他器官。

Fig. mRNA / in vivo-jetRNA®复合物通过各种途径注射小鼠后的生物分布

  

Fig. 小鼠腹腔注射mRNA/in vivo-jetRNA®复合物后的各器官分布


in vivo-jetRNA®显示了良好的耐受性和安全性。注射后所有动物均保持健康,没有动物出现疼痛反应。经不同途径进行mRNA/in vivo-jetRNA®复合物给药后,靶器官形态完好,未见组织损伤。用作mRNA疫苗没有出现毒性迹象,与病毒载体疫苗或抗原呈递细胞(APC)肽相比,它对接受者更安全,生产更迅速,成本更低,而且它有巨大的潜力来应对许多未被满足的医疗需求。



联系方式

如果您想了解更多我们的产品可以浏览我们的网站www.polyplus-transfection.com

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China@polyplus-transfection.com

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