直播预约丨从体外到活体转染 核酸递送方法全解析

转染是细胞生物学常用的试验技术，通过将外源核酸导入细胞，进行蛋白表达和基因功能研究，是研究细胞和动物模型的重要工具。

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更少的转染试剂和DNA用量

同样，基于阳离子聚合物 jetOPTIMUS^®还具有毒性小、细胞活率高和操作方便兼容血清抗生素，转染前后无需换液等优点

非常温和 能够保持良好的细胞活率和细胞形态

按照标准操作手册 在Vero细胞上进行转染

更多jetOPTIMUS^®在神经细胞和干细胞中的案例分析， 请阅读干细胞和神经细胞转染利器｜且看jetOPTIMUS如何解决难转染细胞问题和干细胞转染利刃：jetOPTIMUS®轻松解决难转染细胞问题

一些文献表明转染低浓度的siRNA能够避免脱靶效应。确实，当转染高浓度siRNA时，会观察到这些非特异性的副作用。因此通过使用尽可能少的siRNA可以提高实验数据的可靠性。INTERFERin^® 专为此而设计：使用低浓度siRNA达到高效率基因沉默。

使用INTERFERin^®递送1 nM siRNA 就可以达到具有选择性的高效基因沉默，而竞争产品需要至少10 nM siRNA来达到50%的基因沉默 (Fig. 1).

Fig. 1: INTERFERin^® 仅需要1 nM siRNA达到有效的基因沉默

更加令人惊叹的是, 使用10 pM siRNA 依然能达到50%的沉默效率 (Fig. 2).

Fig. 2. INTERFERin^®在极低的 siRNA 浓度下也能达到高效基因沉默。A549-GL3Luc cells 在有血清的条件下使用INTERFERin® 转染浓度逐步降低的 anti-Luc siRNA. 48小时后检测Luciferase的表达. control siRNA没有观察到抑制效果

对多数贴壁细胞或原代细胞，1 nM siRNA能够达到超过90%的基因沉默。对于悬浮细胞，使用5 nM siRNA依然能达到80%的沉默效率。

Table 1: 成功使用INTERFERin^®达到高效基因沉默的细胞系

在保持细胞活率方面，INTERFERin^®优于其他转染试剂，能够保持极佳的细胞活率。我们提供简单即用的标准操作说明书，1nM的起始用量在大多数细胞中可达到有效的基因沉默。更多详情请阅读1nM? 10pM? siRNA高效基因沉默 更少用量 更少脱靶效应

DNA转染要穿过两层屏障，而mRNA转染只需要穿过一层屏障，不需要穿过核膜，对细胞比较温和；且mRNA输送无需进入细胞核，与DNA转染相比，消除了基因组整合的风险。

DNA 转染 = 2层屏障 ，mRNA 转染 = 1层屏障

对于原代细胞，神经细胞等比较难转染的细胞，使用jetMESSENGER^®转染mRNA能够达到比较高的转染效率。

jetMESSENGER^® 用于难转染细胞的mRNA转染，效率高于主要的DNA转染试剂

Fig. 1. jetMESSENGER^® 转染效率优于主要的DNA转染试剂竞争者。按照厂商建议条件在不同细胞中转染编码eGFP的mRNA  (5meC, pseudo-uridine, Trilink™) 或DNA。转染24小时后用FACS检测转染效率。

jetMESSENGER^® 在难转染细胞中非常高效，相比于其他mRNA转染试剂

Fig. 2. jetMESSENGER®相比主要竞争者有更高的转染效率。在不同的难转染细胞系中按照厂家建议条件使用 jetMESSENGER^® or Lipofectamine^® MessengerMAX™转染eGFP mRNA (5meC, pseudo-uridine, Trilink™)。转染后24小时用FACS检测转染效率。

更多相关信息，请阅读干细胞和神经细胞转染利器｜且看jetOPTIMUS如何解决难转染细胞问题

在体内进行核酸递送可使用病毒载体和非病毒转染方法。病毒载体的递送效率比较高且具有靶向性；但是使用病毒载体会引起一定的免疫反应，并且病毒载体生产周期较长，成本较高。

使用非病毒方法进行体内核酸递送具有以下优点

• 更加安全

• 性价比更高

• 使用便捷

这里我们给大家介绍两款活体转染试剂，适用于任何动物模型的核酸转染，操作简便，仅需两个步骤。可满足处于各个阶段的客户，包括从科学研究，到初期的工艺开发，临床前研究以及临床试验和商业化。可用于基因治疗和疫苗。

in vivo-jetPEI^® 可在任何器官或组织中，通过基因过表达或者基因抑制的方法进行基因功能研究。它可以通过全身和局部注射目标多种器官。注射途径在很大程度上决定了靶器官。例如，在静脉注射时， in vivo-jetPEI®递送的 DNA 主要在肺部表达，也在肝脏、胰腺、肾脏、脾脏、膀胱、心脏和动脉中表达。而腹腔注射，基因在卵巢、胰腺、膈肌、子宫和胃中表达 (Fig. 1)。为了实现器官特异性基因表达，可以结合细胞特异性启动子和局部注射途径，达到在特定器官/组织中的基因表达。

Fig. 1: 小鼠中使用in vivo-jetPEI®通过全身注射进行核酸递送的靶向器官

使用便捷：两步法操作

in vivo-jetPEI^®使用便捷，和体外转染类似，核酸和in vivo-jetPEI®混合后，直接注射到动物体内(Fig. 2)。

Fig 2: in vivo-jetPEI^® protocol in mice

质量等级

in vivo-jetPEI^®有研发级用于基础研究和实验验证，PC级可用于临床前生物分布和毒理研究，GMP级 in vivo-jetPEI^®是最高质量等级的，符合人体临床试验的质量要求。

体内转染试剂是一种有效的，非病毒载体的核酸递送试剂。它们易于使用，性价比高，被认为是RNA递送的安全和高效的载体。mRNA转染正迅速发展成为一种有前景的核酸治疗方法。非病毒mRNA递送方法已经证明了在疫苗和癌症治疗方面的高效性。

Polyplus开发出一种用于体内递送mRNA的转染试剂 — in vivo-jetRNA^®。该试剂可以通过全身或局部注射，在不同的动物模型中目标多种器官。通过in vivo-jetRNA^®递送mRNA仅需两个步骤，可用于疫苗接种、抗癌研究、CRISPR/Cas基因编辑及蛋白替换等多个领域。

In vivo-jetRNA^®能保护其有效荷载免受无处不在的核酸内切酶降解，防止与蛋白质的非特异性相互作用，并促进有效的进入细胞，这让其成为使用不同给药途径将mRNA递送至各器官的首选试剂。它介导的mRNA递送可通过腹腔注射在多个器官中表达，尤其是在免疫反应中起主要作用的脾脏和淋巴结，以及肝脏、胰腺和子宫等其他器官。

Fig. mRNA / in vivo-jetRNA^®复合物通过各种途径注射小鼠后的生物分布

Fig. 小鼠腹腔注射mRNA/in vivo-jetRNA^®复合物后的各器官分布

in vivo-jetRNA^®显示了良好的耐受性和安全性。注射后所有动物均保持健康，没有动物出现疼痛反应。经不同途径进行mRNA/in vivo-jetRNA^®复合物给药后，靶器官形态完好，未见组织损伤。用作mRNA疫苗没有出现毒性迹象，与病毒载体疫苗或抗原呈递细胞(APC)肽相比，它对接受者更安全，生产更迅速，成本更低，而且它有巨大的潜力来应对许多未被满足的医疗需求。

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