2022-09-22 18:59:08, 沃特世 沃特世科技(上海)有限公司
17β-雌二醇(E2)和雌酮(E1)是非妊娠人体内两种主要生物活性雌激素。E2主要由卵巢和睾丸通过睾酮芳香化生成;E1主要通过雄烯二酮的衍生生成,E2可代谢为E1,E1也可以转化为E2。但在非妊娠人体内E1和E2的浓度都很低,只有pg级,准确定量非常困难。
E1和E2的临床应用有很多,包括诊断和检查女性性早熟和青春期延迟、类固醇激素代谢障碍(例如芳香酶缺乏症和17α-羟化酶缺乏症)、辅助临床诊断、影像学研究和骨矿物质密度测量的手段,用于对绝经后女性以及年龄较小的男性进行骨折风险的评估、监测绝经后妇女的低剂量女性激素替代疗法及监测抗雌激素治疗(如芳香酶抑制剂治疗)等。
E2还可评估女性性腺机能减退和闭经过早、评估卵巢状态,包括卵泡发育,用于辅助生殖方案(例如体外受精)、结合促黄体激素测量,监测性腺功能减退的绝经前妇女的雌激素替代疗法、评估男性女性化,包括男性乳房发育症、诊断男性产生雌激素的肿瘤等。
因为上述E2和E1重要的临床意义,需要准确测定浓度极低的E2和E1。目前临床上普遍使用的免疫分析技术灵敏度不佳且缺乏普适的选择性,而已发表的LC-MS/MS方法样品用量大、样品萃取方法复杂,通常都包括衍生。
250 μL样品中加入20 μL内标混匀。加入1 mL 85:15(v:v)正己烷:乙酸乙酯,充分混合10 min进行液液萃取。将样品以4,000 g离心5 min,然后取700 μL上面有机层转移到96孔板中。将样品氮气吹干并复溶于20 μL甲醇和30 μL蒸馏水中。处理后的样本用 Xevo TQ-XS IVD仪器进行定量分析。
图3. Waters ACQUITY UPLC I-Class/Xevo TQ-XS IVD系统
如下图所示,E2在血清样本中的浓度达到2 pg/mL时,峰形良好,信噪比满足定量要求。
如下图所示,血清中加标2 pg/mL E2和E1的样品,经前处理后5天的精密度(重现性)≤10% CV,且S:N(ptp)≥10:1时的最低可测定浓度,E2定量限为3 pg/mL(11 pmol/L) ,E1的定量限为2 pg/mL(7.4 pmol/L)。
本应用证明,Xevo TQ-XS IVD仪器优异的灵敏度可以满足低至2 pg/mL浓度的雌激素检测,是⼀套性能稳定且适合内分泌激素检测的系统。该方法前处理简单、取样量少、灵敏度高、抗干扰性强、基质效应低,非常适用临床样品对于雌激素的准确定量分析。
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