解决方案|液相色谱法测定乳制品中维生素A和E的含量

前言

维生素A又名视黄醇，属于脂溶性维生素，维生素A对于婴幼儿的骨骼和视力的生长发育有很大的作用，同时其还具有维持正常的视觉功能防止夜盲症、促进机体正常生长发育、增强机体的造血功能和预防癌症等作用。维生素E又名生育酚，具有抗不育功能和抗氧化作用，在生命过程中起着重要的作用。维生素A与E是重要营养添加剂，建立维生素A和E的检测方法对监测其含量意义重大。

目前测定乳制品中维生素A和E的方法有紫外分光光度法、薄层层析法、荧光法、气相色谱法和高效液相色谱法等。本文根据GB5009.82-2016《食品中维生素A、D、E的测定》，建立了快速测定乳制品中维生素A和E的含量的方法，供相关人员参考。

LC-5520液相色谱仪

PART ONE

实验部分

实验原理

试样中的维生素A及维生素E经皂化（含淀粉酶先用淀粉酶酶解）、提取、净化、浓缩后，反相液相色谱柱分离，紫外检测器或荧光检测器检测，外标法定量。

仪器与试剂

LC-5520 液相色谱仪（紫外检测器）；

AS-405 自动进样器；

DM-101 在线脱气机；

无水乙醇（不含醛类物质）；

L-抗坏血酸；

氢氧化钾；

石油醚；

无水硫酸钠；

甲醇；

维生素A标准品；

维生素E标准品。

实验条件

色谱柱：C18柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；

流动相：甲醇；

流  速：1.0 mL/min； 

柱温：35 ℃；

检测波长：维生素A：325nm 维生素E：294nm；

进样量：20 μL。

样品处理

称取试样约10 g（精确到0.1 mg）于250 mL三角瓶中，用50 mL 温水水使其溶解。然后加入约 100 mL 抗坏血酸的乙醇溶液，充分混匀加25 mL 氢氧化钾水，于55℃下搅拌皂化约 45 min，石油醚萃取，无水硫酸钠干燥，滤液在 40 ℃±2 ℃充氮条件下蒸至近干。用石油醚定容至10ml。准确移取2.0 mL ，置于 40 ℃±2 ℃的氮吹仪中，吹干。加 5.0 mL 甲醇，振荡溶解残渣，离心静置至室温后待测。

PART TWO

实验结果

将不同浓度的维生素A和维生素E混合标准溶液依次注入液相色谱仪中分析，分别以维生素A和维生素E峰面积为纵坐标，维生素A和维生素E浓度为横坐标绘制标准曲线。并将处理后的样品注入液相色谱仪，在标准曲线读取测试结果，并计算维生素A和维生素E含量。下图为样品中维生素A和维生素E的谱图。

 图1 奶粉样品中维生素A、E谱图

PART THREE

实验总结

液相色谱法是测定脂溶性维生素A、E的常用方法，本文根据GB5009.82-2016《食品中维生素A、D、E的测定》，建立了快速测定乳制品中维生素A和E的含量的方法，经实验验证，该方法结果准确、可靠，可供相关人员参考。在本实验过程中，旋转蒸发时的氮气保护和皂化反应是测定中的关键影响因素，需要注意皂化的温度和时间，以保证皂化反应的的完全进行。

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