先睹为快:高效转染试剂的专属检测方法

2022-07-21 20:01:57, 沃特世 沃特世科技(上海)有限公司




腺相关病毒(AAV)因其高效且长期的基因表达、易操作而无致病性、低毒性等特点,已成为目前基因治疗递送的重要载体。然而,AAV制造过程复杂、限制因素多,已成为整个行业的瓶颈。在大规模生产中,稳健的瞬时转染过程是保证高产量可靠AAV病毒载体的商业化制造过程关键。






高效转染试剂 — FectoVIR®-AAV

在各种转染试剂中,FectoVIR®-AAV由于其超高的转染效率保证了更高的病毒滴度,使得其非常适用于工业级的大规模生产。FectoVIR®-AAV本身是一种全化学合成不含动物源阳离子型聚合物转染试剂,由于这类结构具有一定的细胞毒性1,因此从生产工艺以及产品安全性的角度出发,需要灵敏且成熟的分析方法对其含量情况进行监控。


分析方法开发

基于上述原因,沃特世上海熙华药业有限公司共同开发了适用于基因-细胞治疗产品的FectoVIR®-AAV专属分析方法。该方法使用沃特世液相色谱仪,搭配XBridge C18色谱柱,结果如图1所示:目标峰峰形良好,FectoVIR®-AAV色谱峰达到基线分离,专属性优异。下面就让我们详细看看方法的具体表现如何。

图1. FectoVIR®-AAV加标溶液色谱图。


方法学情况


 01
灵敏度和线性


我们在沃特世液相色谱仪上评估了该方法的灵敏度。使用30 ppm和60 ppm标准品溶液,结果见图2。通过推算得出该方法的检测限和定量限分别为3 ppm和6 ppm。

图2. 评估FectoVIR®-AAV的检出限和定量限。

如图3所示,该方法在30 - 300 ppm的浓度范围内呈线性相关良好,相关系数为0.9999。

图3. FectoVIR®-AAV标准曲线。

 02
准确度与重复性


在制剂中分别加入75 ppm、150 ppm和225 ppm三个水平浓度的FectoVIR®-AAV进行加标回收率实验,回收率在96.2 % - 102.8 %之间,说明方法具有优良的抗干扰性和准确度。    

通过重复进样加标溶液,评估了该方法的准确度和重复性。结果显示RSD为1.4 %(n=6),方法精密度优异

图4. 三水平FectoVIR®-AAV加标回收率。

图5. 连续6针加标溶液图谱。

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结论

通过上述实验,可知该方法专属性好、灵敏度高、工作曲线相关性优异,且有着优良的准确度精密度,可以作为生物药制剂产品中FectoVIR®-AAV含量及残留测定的优选解决方案(想要了解更多沃特世在细胞与基因质量领域的解决方案?欢迎点击文末阅读原文


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参考文献:

1. Neu M, Fischer D, Kissel T. Recent advances in rational gene transfer vector design based on poly (ethylene imine) and its derivatives. J Gene Med, 2005; 7: 992–1009.




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