2022-07-20 16:14:36
热启动Taq DNA聚合酶是经过化学修饰或者抗体/配体结合的Taq DNA聚合酶,在常温下,DNA聚合酶的活性受到抑制,直到PCR体系预变性一段时间后其活性才能被充分释放出来发挥DNA聚合的作用。通过这种方式能够极大程度减少引物二聚体和非特异扩增,所以热启动Taq DNA聚合酶在多重PCR,染料法和探针法荧光定量PCR检测中受到广泛的应用。然而目前各生产企业的热启动Taq DNA聚合酶产品由于验证方法不同很难判定其综合性能,亟需一个统一的规范文件来确定热启动Taq DNA聚合酶性能。
2022年7月1日,深圳市标准化协会发布了《热启动Taq DNA聚合酶性能验证》团体标准,自2022年7月10日起实施。该标准规定了热启动Taq DNA聚合酶的分类、性能要求、验证方法、验证规则,为热启动Taq DNA聚合酶生产企业和使用热启动Taq DNA聚合酶进行PCR相关实验的各类检测机构提供了指导思路,对分子诊断行业的PCR技术产品开发起到推动助力作用。
该团体标准由深圳华大医学检验实验室牵头提出,并广泛征集了各原料生产企业的建议。天根生化科技(北京)有限公司受邀参与文件起草,在框架优化和核心内容修订方面提出建设性建议。
经实验验证,天根开发的高亲和力抗体修饰的Taq DNA聚合酶(ET108)符合团体标准。
实验例1
用于多重PCR扩增
M. 天根 DNA Marker Ⅲ; 1. T品牌A产品; 2. T品牌B产品; 3. T品牌C产品; 4. Th品牌同类产品; 5. 天根 ET108
采用不同品牌热启动Taq DNA聚合酶以人293T细胞基因组为模板分别做小片段和大片段的多重PCR扩增(片段大小见图示), 天根 ET108显示出优秀的多重扩增能力。
实验例2
配制染料法qPCR试剂的优秀原材料
采用天根 ET108 配制SYBR Green Ⅰ荧光定量试剂检测人Hela细胞总RNA 中的GAPDH基因,1μg总RNA 由FastKing RT Kit (KR116) 试剂盒反转录得到cDNA,之后分别稀释5倍、50倍、500倍、5000倍、50000倍为模板进行扩增。
结果显示,不同浓度梯度模板扩增得到的ct值跨度均一,熔解曲线峰型特异,标准曲线线性化良好,扩增效率接近100%。说明ET108是配制染料法qPCR试剂的优秀原材料。
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