Cocoon®和4D-Nucleofector™LV联用T细胞非病毒转导扩增方案

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图1：工作流程图

以新鲜/冷冻的PBMC作为起始，4D-Nucleofector ^™转染后，转入Cocoon^®平台，第10天收获最终的T细胞产物。

第0天-完成电转的PBMC在Cocoon^® cassette中静置4小时恢复，用含有IL-2和TransAct的X-VIVO培养基进行80%换液。

第1天–进行50%的培养基交换（276ml容量）。

第3天–进行80%的培养基交换（450ml容量），并移除TransAct。

第4天到第9天-进行75%的培养基交换（450ml容量）。

第10天-收集扩增的T细胞。

在第0、1、4、7和10天取样分析。

图2 A-C：瞬时转染的GFP表达随着时间的推移而下降

A:%GFP⁺CD3⁺T细胞群；B:%GFP⁺CD4⁺T细胞群；C:%GFP⁺CD8⁺T细胞群。

（冻存样品n=2 来自1个donor；新鲜样品n=3来自2个donor）

图3：细胞扩增曲线图

图4 A-B：第1天与第10天的CD4⁺:CD8⁺比率

A：第1天的CD4⁺:CD8⁺比例；B: 第10天CD4⁺:CD8⁺比例。

表1：验收标准与终产品关键质量属性

转染效率、细胞产量、细胞活力和%CD3⁺细胞纯度符合验收标准。

这些研究结果说明了Cocoon^®平台联合4D-Nucleofector^™LV 单元实现非病毒细胞治疗生产过程自动化的实用性。

通过在激活和扩增前转染PBMC，此联合平台生产了满足临床相关要求（高细胞产量、转染效率和纯度）的基因修饰T细胞产物。

Cocoon^®平台和4D-Nucleofector^™LV 单元提供了一种替代性的非病毒基因转导体系。

该集成平台提供转染和操作可扩展性、高细胞产量、减少成本、减少操作员错误以及更好的过程控制，以提供高质量的细胞免疫疗法。