中科院发文揭示干旱胁迫下植物根冠比的调控机制

2022-07-16 03:50:38, hhl 美谷分子仪器(上海)有限公司


植物在其整个生命周期中受到来自周围环境的各种胁迫。作为主要的非生物胁迫之一,干旱严重影响植物正常的生长发育。“根冠比”是指植物地下部分与地上部分的鲜重或干重的比值。植物无法自行移动,为了更好地在干旱状态下生存,植物进化出复杂的根系来从土壤中获取水分和养分。植物可以通过改变根系的生长方向和侧根分布,增加根系生长和减少枝条生长,达到调整根冠比和优化根系结构的目的,然而对于干旱胁迫下植物根冠比调控机制的研究仍然较少。


2021 年 12 月,中国科学院分子植物科学卓越创新中心赵杨研究组在 Nature Plants 杂志发表题为《Phosphorylation of SWEET sucrose transporters regulates plant root:shoot ratio under drought》的研究论文,从分子层面揭示了干旱胁迫下植物根冠比的调控机制。

在长期的进化过程中,植物形成了严密且复杂的调控网络来应对干旱胁迫,这些植物对干旱胁迫的反应主要与植物激素信号通路有关。干旱胁迫会引起 ABA 途径的激活,生长素和脱落酸(ABA)共同控制向地性、向水性和侧根生长。本文中,研究人员的实验结果表明:在渗透胁迫下,野生型拟南芥根冠比增加,ABA 突变体根冠比变化较小。


作为地下的主要营养器官,植物根系依靠光合产物(如蔗糖)的转运维持生长。在渗透胁迫下,野生型植株根部的蔗糖积累量增加,ABA 突变体根部的蔗糖积累量减少。这些结果表明,干旱胁迫诱导植物中 ABA 的积累,激活 ABA 信号途径。在渗透胁迫下 ABA 对调节植物根冠比,促进植物根系生长,以及蔗糖积累和分配方面具有重要作用。


作为主要的光合产物,蔗糖可以通过韧皮部从枝条运输到根部。在蔗糖长距离运输过程中,韧皮部蔗糖转运蛋白 SWEET11 和 SWEET12 发挥重要作用,参与干旱胁迫下植物根冠比的调控。研究人员在 SWEET11/12 中发现了两个在干旱胁迫下被 SnRK2s 蛋白激酶磷酸化修饰的丝氨酸残基(第 237 和 248 位丝氨酸)。磷酸化发生在 SWEET 蛋白 C 末端,位于细胞质内,是潜在的调控区。SWEET11/12 的磷酸化可以增强蔗糖转运,并有助于改善植物根系生长和提高抗旱性。即使在非胁迫条件下,模拟磷酸化 SWEET 的表达在提高植物根系生长的同时,还可以增强地上部分的生长。

蛋白质之间的相互作用(protein-protein interaction, PPI)是细胞进行一切代谢活动的基础,植物的生长发育及其应对各种生物或(和)非生物胁迫的生理活动主要通过细胞中的蛋白质来进行调节和控制。探究植物中蛋白质相互作用的研究方法,不仅可以了解和揭示蛋白质在植物物质转运、信号转导和代谢调控中的功能,阐明植物蛋白质作用的复杂网络系统,对于提高作物产量,尤其是胁迫下的作物稳产也具有重要意义。这篇高分文章中研究人员使用 Molecular Devices  SpectraMax i3x 多功能微孔板读板机进行 Split-LUC 测定,验证了 SWEET11 和 SWEET12 与 SnRK2 的潜在相互作用,从分子层面揭示了干旱胁迫下植物根冠比的调控机制。

植物蛋白质相互作用研究方法包括体内、体外及生物信息学(in silico)等。体内研究方法包括酵母双杂交系统(Y2H),双分子荧光互补技术(BiFC, Bimolecular fluorescence complementation assay),萤光素酶片段互补技术 Split-LUC(Split luciferase complementation assay),以及荧光共振能量转移法(FRET)。体外研究方法(in vitro)包括蛋白质免疫共沉淀法(Co-IP),GST  融合蛋白 pull-down 技术,串联亲和纯化(TAP)技术和蛋白质微阵列(Protein microarrays)。


这里我们跟大家分享一些利用酶标仪检测植物中蛋白质相互作用的方法,包括 BiFC,FRET 以及 Split-LUC 。



01

双分子荧光互补技术(BiFC)

BiFC 技术是将荧光报告蛋白按照规则分成没有荧光的两个片段作为标记分子,将标记分子分别与诱饵蛋白和捕获蛋白融合并在细胞内共表达,只有当诱饵蛋白和捕获蛋白发生相互作用的情况下,两段不完整的荧光报告蛋白才会形成完整的报告蛋白,发出荧光。BiFC 技术是目前最灵敏的蛋白互作检测方法,使用具备荧光检测功能的酶标仪可以对荧光信号进行测定。

02

荧光共振能量转移法(FRET)

如果想要确定蛋白互作发生的位置,可以采用荧光共振能量转移法(FRET)。FRET 是距离很近的两个荧光分子间产生的一种能量转移现象。当供体荧光分子的发射光谱与受体荧光分子的吸收光谱重叠,并且两个分子的距离在 10 nm 以内时,会发生一种非放射性的能量转移,即 FRET 现象。获得的光信号可以在具备荧光检测功能的酶标仪上进行检测。荧光共振能量转移法(FRET)能比较可靠地反映蛋白质相互作用时的距离,检测到瞬时、较弱的蛋白质相互作用,并且可以同时检测到两个蛋白质在细胞内的分布和作用位点。

03

萤光素酶片段互补技术(Split-LUC)

Split-LUC 技术是基于烟草瞬时表达的萤火虫荧光素酶片段互补实验,与 BiFC 技术的原理相似。Split-LUC 技术的原理是将萤火虫萤光素酶分割成 N 端(nLUC)和 C 端(cLUC)两部分, 这两部分不会自发重组并产生作用。只有当分别与这两部分融合表达的两个蛋白间存在相互作用时,萤火虫荧光素酶的两部分在空间上相互靠近,从而重新形成荧光素酶,获得酶活性。当加入特定的荧光素酶底物时,荧光素酶即可水解底物,产生荧光,使用具备化学发光检测功能的酶标仪可以对光信号进行测定。Split-LUC 的优点是假阳性低,背景值低,结果可靠。相较于酵母双杂交实验在异源条件下检测蛋白间相互作用情况,荧光素酶互补实验能更好的反映植物生理条件下蛋白间互作情况。与同样在植物生理条件下检测蛋白间互作的 FRET 和 BiFC 相比, Split-LUC 技术不受植物自发荧光的干扰,并且操作简单。

参考文献:

Chen, Q., Hu, T., Li, X. et al. Phosphorylation of SWEET sucrose transporters regulates plant root:shoot ratio under drought. Nat. Plants 8, 68–77 (2022).



关于美谷分子仪器

Molecular Devices 始创于上世纪 80 年代美国硅谷,并在全球设有多个代表处和子公司。2005 年,Molecular Devices 在上海设立了中国代表处,2010 年加入全球科学与技术的创新者丹纳赫集团,2011 年正式成立商务公司:美谷分子仪器 (上海) 有限公司。Molecular Devices 以持续创新、快速高效、高性能的产品及完善的售后服务著称业内,我们一直致力于为客户提供在生命科学研究、制药及生物治疗开发等领域蛋白和细胞生物学的创新性生物分析解决方案。



  • 客服电话: 400-6699-117 转 1000
  • 京ICP备07018254号
  • 电信与信息服务业务经营许可证:京ICP证110310号
  • 京公网安备1101085018
  • 客服电话: 400-6699-117 转 1000
  • 京ICP备07018254号
  • 电信与信息服务业务经营许可证:京ICP证110310号
  • 京公网安备1101085018

Copyright ©2007-2024 ANTPEDIA, All Rights Reserved