1nM? 10pM? siRNA高效基因沉默更少用量更少脱靶效应

2022-06-01 11:04:25, Polyplus

基因沉默是基因表达调控的一种重要方式。siRNA可以介导特定基因的表达抑制。Polyplus的转染试剂INTERFERin®非常适用于RNA干扰试验，使用极低浓度的siRNA达到高效的基因沉默，确保可靠的试验结果。

➤ 用量：低至1nM siRNA 减少脱靶效应

➤ 沉默效率：在多种细胞系中沉默效率超过90%

➤ 毒性小：质粒和转染试剂用量小极佳的细胞活率

➤ 应用场景：siRNA, miRNA and other oligonucleotides. 仅用于miRNA转染的文献就超过1000篇

更少的siRNA，更少的脱靶效应

一些文献表明转染低浓度的siRNA能够避免脱靶效应。确实，当转染高浓度siRNA时，会观察到这些非特异性的副作用。因此通过使用尽可能少的siRNA可以提高实验数据的可靠性。INTERFERin^® 专为此而设计：使用低浓度siRNA达到高效率基因沉默。

使用INTERFERin^®递送1 nM siRNA 就可以达到具有选择性的高效基因沉默，而竞争产品需要至少10 nM siRNA来达到50%的基因沉默 (Fig. 1).

Fig. 1: INTERFERin^® 仅需要1 nM siRNA达到有效的基因沉默

更加令人惊叹的是, 使用10 pM siRNA 依然能达到50%的沉默效率 (Fig. 2).

Fig. 2. INTERFERin^®在极低的 siRNA 浓度下也能达到高效基因沉默。A549-GL3Luc cells 在有血清的条件下使用INTERFERin^® 转染浓度逐步降低的 anti-Luc siRNA. 48小时后检测Luciferase的表达. control siRNA没有观察到抑制效果

使用INTERFERin^®转染1 nM anti-lamin A/C siRNA可以显著降低lamin 的基因表达至几乎检测不到的水平 (Fig. 3).

Fig. 3: 使用INTERFERin^® 转染1 nM siRNA达到高效和特异性基因沉默

沉默效率超过90%

对多数贴壁细胞或原代细胞，1 nM siRNA能够达到超过90%的基因沉默。对于悬浮细胞，使用5 nM siRNA依然能达到80%的沉默效率。

Table 1: 成功使用INTERFERin^®达到高效基因沉默的细胞系

极佳的细胞活率

在保持细胞活率方面，INTERFERin^®优于其他转染试剂。在转染1 nM siRNA48小时后, 使用INTERFERin®的细胞很健康, 而使用reagent S 的细胞可以观察到明显的细胞毒性(Fig. 4).

Fig. 4: INTERFERin^® 对细胞及其温和，在siRNA转染48小时后能够维持良好的细胞形态，相比其他竞争者的试剂.

简单即用的标准操作说明书

1nM的起始用量在大多数细胞中可达到有效的基因沉默
兼容血清、抗生素，转染前后无需换液

应用：miRNA转染

microRNA (miRNA)的转染正越来越多地被用来分析特定miRNAs在细胞中的功能。INTERFERin^® 可以用来递送 miRNA，miRNA mimics or pre-miRNAs, 达到高效的基因沉默或刺激基因表达。确实，一些miRNA通过和目的基因启动子的关联可诱导基因表达。例如，通过INTERFERin^®递送的miR-373 可引起E-Cadherin的表达提高3倍 (Fig. 5).

Fig. 5: 使用INTERFERin^® 转染miR-373提高了E-cadherin的表达. 接种在六孔板中PC-3 cells，使用 8 µl/per well的 INTERFERin^® 转染miR-373 (25 nM)。转染72小时后，用RT-qPCR检测E-cadherin mRNA的表达水平。

基于阳离子的INTERFERin^®只需要使用很少量的寡核苷酸，转染过程对细胞很温和。并且，简单可靠的操作步骤保证了可重复性的结果。miRNA的转染只需少量的INTERFERin^®就可以达到高效的基因沉默或基因表达。使用不同浓度的INTERFERin^®能够达到几乎相同的效果，使得INTERFERin^®成为性价比很高的试剂。例如，使用不同量的INTERFERin^®引起的基因表达量增加倍数都在1.5到1.8之间 (Fig. 6).

Fig. 6: 极少量的INTERFERin^® 即可达到高效率。PC-3 cells（六孔板）使用4, 6 or 8 µl INTERFERin^® /well 转染10nM miR-373 . 转染后72小时, 使用Western blot分析E-cadherin的表达，

使用INTERFERin^® 转染miRNA和miRNA相关分子而发表的文献数量近年来呈指数级增长 (Fig. 7).

Fig.7: INTERFERin^® 用于miRNA转染的文献数量不断增长

近期我们陆续向大家介绍了Polyplus几款高效&高性价比的转染试剂，从通用型DNA/siRNA转染试剂jetPRIME®，到适用于难转染细胞的jetOPTIMUS®, 到体内转染试剂in vivo jetPEI®和in vivo jetRNA®. 点击下方链接回顾往期内容。

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Polyplus-transfection®

Polyplus-transfection^®是一家专业的生物技术公司，专注于为生命科学研究、体内转染、生物制品制造以及细胞和基因治疗的客户提供创新的核酸递送解决方案。Polyplus-transfection^®拥有近20年的转染经验，所开发的转染试剂可满足处于各个阶段的客户，从科学研究，到初期工艺开发，到临床前研究以及临床试验以及商业化。

公司开发的用于基因治疗和细胞治疗领域的病毒载体生产试剂PEIpro^®系列产品已经越来越广泛的应用到了众多的临床试验中并成为了行业的金标准。其中PEIpro^®-GMP是市面上第一款完全GMP级转染试剂。