每天在做的转染，还能有什么新意？

将亲代和GFP转染的中国仓鼠卵巢细胞（分别是CHO和CHO-GFP）置于含10% FBS的Ham ''s F-12培养基中（Gibco#11765054）， 于37℃，5% CO2的培养箱进行培养。用胰蛋白酶/EDTA处理并收集两种细胞系细胞，计数准确的细胞数量。将已知的不同混合比例的转染和非转染细胞种到96孔板来模拟不同转染效率的样品，每孔200 µl总数10,000个细胞（表1）。这些细胞在荧光染色和图像采集前在96孔板中静置一夜。检测前，所有细胞由 0.01 mg/ml的Hoechst 33342（Thermo Scientific）避光室温染色30分钟。

表1：将两种细胞混合，模拟各种转染效率

使用转染效率应用程序进行细胞成像，参数设置如表2所示。在本实验中，使用了4倍物镜和全微孔成像模式，不仅如此，这些参数还可以根据特定的孔板和图像分辨率要求而变化。图像采集参数分别对Blue和Green两个荧光通道进行了优化，如LED强度、对焦补偿和曝光时间等。当使用多个荧光标记时，必须纠正串色，因此也包含了串色设置。除了成像分析外，还通过对同一孔进行多点测量的方式，从底部记录GFP信号的荧光强度。多功能检测和荧光成像能力的结合，使得细胞样品的可视化和功能性检测能够在同一实验中顺利完成。

表2：底部荧光和汇合度检测设置

图2：使用Spark Cyto成像和计算获得的各种转染率结果叠加图。

荧光成像测定的转染效率与荧光强度测量结果相关，在整个稀释范围内，两者呈良好的线性关系（图3）。

图3：成像法测定的转染效率与GFP荧光信号呈线性相关。

Spark Cyto多功能酶标仪非常适合活细胞成像和检测。本文中的实验结果证实，为标准成像应用预定义的实验方案是确定细胞特征（比如：转染效率）便捷且可靠的工具。它包含实验方法设置、自动化处理以及结果的综合评价，能帮助研究者轻而易举地计算出每个样本的转染效率比。

 本产品仅供科研使用。不用于临床诊断。