剖析发表高分文章和极具创新性的类器官套路

近3年来，类器官可谓是火出一片天，模型本身具有极高的创新性，深受基金申请和高分杂志的青睐；由于人源化类器官可真实模拟人体内真实反应及机制改变，所以是疾病研究的不二之选，可据此轻松发表高分文章并申请国自然。今天我们将通过2020年发表在oncogene（IF=9.867）上的一篇文章讲解一下类器官研究的套路，并在文末附上肿瘤及其他类器官构建，培养，基因编辑及染色的操作课程！

图1. 科技部发布了“十四五”国家重点研发计划的6个重点专项: 

其中就包括类器官与人源化动物模型

胃癌是目前发病率及死亡率都排在前列的一种肿瘤，进展期胃癌目前的辅助治疗仍为以氟尿嘧啶为主的化疗，但是氟尿嘧啶在在胃癌中极易出现耐药性，成为制约胃癌预后改善的主要原因。类器官由于可以真实模拟人体内真实反应，因此对于耐药性研究得天独厚，本文构建了氟尿嘧啶原发及继发耐药的胃癌类器官，寻找特异性靶点并进行验证。

2.1 构建类器官库

研究方法及结果：

A-B：构建胃癌类器官库，并检测IC50，明确原发敏感及耐药类器官

D-E：将敏感株诱导为耐药株，并示类器官的明场及HE鉴定图片

第一步：构建类器官库（10个以内），鉴定原发耐药及敏感类器官，并将敏感株诱导为耐药株。

改进：需要将类器官对应患者的临床随访结果加入到A-B图下，以证明可模拟人体内真实反应

2.2 转录组学-筛选导致耐药的靶点

研究方法及结果：

A-D：将亲本敏感类器官及诱导耐药类器官进行对比，进行转录组学比较差异基因。

第二步：转录组学对比亲本株与耐药株，比较差异基因，筛选靶点；

2.3 靶点验证-临床样本验证

研究方法及结果：

C：使用临床样本验证所筛选到的靶点KHDRBS3在胃癌中高表达；

D：IHC临床样本验证KHDRBS3水平与接受氟尿嘧啶治疗胃癌患者生存预后的相关性。

第三步：临床样本验证所筛选的靶点，表达与预后相关性，增加靶点的实际价值；

改进：C图中将样本如果可以替换为耐药患者敏感患者样本的对比会更完美。

2.4 表型验证

1. 研究方法及结果（在高表达且耐药的类器官中进行敲除验证）：

A-B：在继发性耐药类器官上敲除KHDRBS3，并进行WB及IHC验证；

C：敲除KHDRBS3后，继发性耐药类器官对氟尿嘧啶的IC50明显降低，变得更为敏感。

表型验证套路：在高表达且耐药的类器官中实行敲除，在低表达且敏感的类器官中实行过表达，并进行表型验证

2. 研究方法及结果（在低表达且敏感的类器官中进行过表达验证）：

A-B：在原发敏感类器官上过表达KHDRBS3，并进行WB及IHC验证；

C：过表达KHDRBS3，并进行氟尿嘧啶IC50检测，发现过表达KHDRBS3后类器官对氟尿嘧啶的IC50上升，变得更为耐药。

第四步：分别通过敲除，过表达靶点基因在类器官上进行功能验证。

改进：应该探索KHDRBS3诱发耐药的机制，将敲除KHDRBS3的类器官与Ccontrol进行转录组学及蛋白组学检测，明确其发挥耐药作用的机制，这个故事会更加完整！

这篇文章在这里就结束了，做的比较简单，从靶点筛选到功能验证，内容少但是能发高分，就是因为类器官是目前很热且创新性很高的一个点，若是能将最后一步改进加入，文章整体水平能提升到NC水平。所以，基于类器官发表文章是具有很大优势的。

类器官是科技部发布了“十四五”国家重点研发计划的6个重点专项之一，在国自然申请中占有很大的优势，只要我们理清逻辑思路，国自然自然可以水到渠成。

1. 构建类器官库： 特殊现象更佳，例如耐药，转移，免疫抑制剂不敏感等；

2. 转录组/蛋白组筛选靶基因：筛选目标基因；

3. 临床样本验证：在临床大样本中验证所筛选靶基因的正确性，将筛选范围进一步缩小；

4. 功能验证：对筛选所得靶基因在类器官层面进行基因编辑，进行肿瘤功能层面验证；

（以上数据适合在国自然申请前期数据中出现）

5. 机制研究：将基因编辑的类器官与对照类器官进行转录联合蛋白组学检测，分析下游通路及靶基因；

6. 解决提出问题：可用转录联合蛋白组学中求得的最佳通路的抑制剂进行作用，进行机制及效果验证，解决所提出的临床问题。

以上一个完整的国自然就完成了。

基于以上内容，我们发现类器官具有极高的创新性，使用类器官发表文章及申请国自然都是很有优势的，对于我们来说，最重要的一步是如何构建类器官，我们下面的课程完整介绍了类器官构建，培养，染色，基因编辑的具体细节及完整步骤，以及如何利用类器官发文章和申请项目，帮助大家更有利的申请国自然，发表高分文章！

课程名称：实验新高地——类器官

课程推出时间：2021年10月

课程链接：https://ke.qq.com/course/4001890，需将该链接复制粘贴至浏览器；或者百度“腾讯课堂”，网站首页搜索“解颐”即可了解本平台所有录播课程。