2021-11-24 01:14:53, 基泰生物 上海基泰生物科技有限公司
液相色谱的清洗方案
液相色谱仪器使用中一定要做好及时的清洗避免堵塞。
我们将结合WATERS UPLC的清洗方案来看看如何做好清洗。
当出现以下几种情况的时候应当对仪器进行清洗:
紫外检测系统的噪音增大和/或基线漂移。
质谱检测系统的灵敏度下降和/或信噪比变差。
在通过ACQUITY UPLC控制台进行检测器灯的能量诊断时,观察到能量偏低(请参考ACQUITYUPLC控制台在线帮助)。
在检测复杂生物基质时,观察到峰变形和/或进样次数偏多。
有必要将本系统的流路系统恢复至几乎全新的洁净水平。
本系统的清洗方法程序如下:
1. 拆除所有的溶剂过滤头。
2. 将色谱柱从系统分开,并在色谱柱的入口管路和出口管处路连接一个UPLC专用的两通(P/N700002636)或限流器(P/N205000547)。
3. 将A1 、A2、B1、B2流动相、柱塞杆密封垫冲洗、进样针弱洗和进样针强洗管路放入一个装有100%异丙醇的洁净瓶中。
说明:如果当前您的UPLC系统里的流动相或溶剂与异丙醇不相容,则先用合适的中间溶液冲洗,以确保相容。
4. 冲洗溶剂管路A1、A2、B1、B2各5min。
5. 冲洗柱塞杆密封垫。
6. 对强洗、弱洗和样品注射器进行5次冲洗。
7. 用50%A1和50%B1,以0.2mL/min的流速清洗系统5.0min。
8. 用50%A2和50%B2重复进行步骤7.
9. 将清洗溶剂放入样品瓶中,进行15次满定量环进样(进样方法请选择5Xoverfill),运行时间=0.2min/流速=0.2mL/min。
10. 用100%甲醇重复进行3-9步,但第7-9步的流速改为1.0mL/min。
11. 用MilliQ水(或等价物)重复进行第3-9步,但第7-9步的流速改为1.0mL/min。
注意:如果连接有质谱检测器,则在进行第12步之前,将其从管道上移除。将洗液流向从两通或限流器出口转向废液排放口。适当时,你可将TUV或PDA留在管路上。然而,你可能需要更换成内径较大的废液管路以取代原来的限流器,以将压力保持在1000Psi以下,避免反压过高而损坏检测池。
12. 用30%硫酸水溶液重复进行第3-9步,但第7-9步的流速改为1.0mL/min。
注意:为避免损坏,请不要将密封垫冲洗管路置于本溶液中,请按照第14步,将该管路置于MilliQ水(或等价物)中。
13. 用MilliQ水(或等价物)重复进行第3-9步,但第7-9步的流速改为1.0mL/min。在继续进行下一步前,应持续冲洗,直至酸碱度呈中性(PH=7)。
14. 如有必要,重新连接质谱检测器。
15. 用100%甲醇重复进行第3-9步,但7-9步的流速改为1.0mL/min。
若想仪器用的好,维护保养很重要。仪器使用过程中,千万不要忽略或者省去一些看似不重要的步骤,例如流动相过滤、水相的更换、进样之前样品过滤膜等,等仪器出现故障之后,维修的成本和浪费的时间远大于平时的维护保养。
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