CE-SDS-LIF方法测定腺相关病毒的结构蛋白纯度
2021-03-11 12:19:56, SCIEX SCIEX
腺相关病毒（AAV）是常用于细胞/基因治疗的载体，由衣壳蛋白及包装的核酸组成。AAV具有表达时间长、特异性强、安全性高、免疫原性低等优势，是细胞/基因治疗中重要的组成部分。AAV衣壳主要分为VP1、VP2和VP3三种蛋白构成，三种结构蛋白的纯度分析是AAV产品质量和安全的重要检测项目；而AAV产品具有多种血清型，且普遍浓度较低，需开发一种针对不同血清型均具有较高分离度和灵敏度的分析方法。
PA 800 Plus药物分析系统连接激光诱导荧光检测器（LIF）（图1）并使用SDS-MW分子量测定试剂盒是分析AAV结构蛋白纯度的有效方法，检测结果如图2。
图1. PA 800 Plus药物分析系统与SDS-MW试剂盒
相比于其他方法，SCIEX提供的CE-SDS-LIF解决方案具有以下优势：
分辨率高：可将VP1、VP2、VP3进行基线分离，便于对杂质及结构蛋白含量的测定；
灵敏度高：使用超高灵敏度的LIF检测器，检出限 （LOD）可达1×109 GC/mL；
样品前处理简单：两步加热即可完成样品的变性及标记（染料为P503），无需进行染料的洗脱；
重现性好：迁移时间的相对标准偏差（RSD）＜0.5%，纯度的RSD＜5%（n=6）；
线性范围宽：样品浓度1×1010 GC/mL至1.6×1014 GC/mL的R2为0.9989；
方法简便：使用SDS-MW试剂盒即可完成检测。
图2. CE-SDS-LIF方法分析AAV的结构蛋白纯度
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