Biochrom30+氨基酸分析仪检测花鲳中水解氨基酸

摘要：

以花鲳为原料，使用Biochrom30+全自动氨基酸自动分析仪对其肌肉的氨基酸组成进行分析。结果表明花鲳肌肉中氨基酸总量的质量百分比为14443.578mg/100g，必需氨基酸(不含色氨酸)占氨基酸总量的39.59%，鲜味氨基酸占氨基酸总量的38.73%。

一、样品前处理

1. 所用试剂

1.1 浓盐酸，浓度≥36%,优级纯

1.2 6mol/L 盐酸：取500mL 盐酸加水稀释至1000mL,混匀。

1.3 水：去离子水

1.4 苯酚：须重蒸

1.5 17种氨基酸标准品

2. 前处理设备

1)  分析天平:感量分别为 0.0001g和0.00001g。

2)  水解管:耐压螺盖玻璃试管,体积为25mL

3)  匀浆机。

4)  无油真空泵

5)  干浴水解浓缩仪

6)  移液管

7)  0.22um滤膜

3. 样品制备（参考国标GB 5009.124-2016）

原料鱼手工去除鱼鳞、鱼皮、鱼刺和内脏，采肉后清洗、沥干，在匀浆机中打成肉糜，于-18℃冰箱中冷冻保存，分析时取出解冻后使用。

4. 试样水解

称取含蛋白7.5-25mg的试样，加入水解管中，加入15mL 6mol/L盐酸，继续向水解管内加入苯酚3滴~4滴。冷冻3min~5min,接到真空泵的抽气管上,抽真空(接近0Pa),然后充入氮气,重复抽真空-充入氮气3次后,在充氮气状态下拧紧螺盖。将水解管放入干浴水解浓缩仪中，110°C水解22-24h，冷却、混匀、开管、转移并定容到50ml容量瓶中，用移液管取适量样液，在干浴水解浓缩仪中50°C吹干，必要时加入少许水，重复吹干1-2次，加入3-5mL PH2.2的稀释上机用柠檬酸钠缓冲液溶解,振荡混匀后,吸取溶液通过0.22μm 滤膜后,转移至仪器进样瓶,为样品测定液,供仪器测定用。

二、分析方法描述（Biochrom 30+）

氨基酸分析仪分析方法参数：

1)  色谱柱：Biochrom Na型阳离子交换树脂柱，4.6´20cm

2)  分离程序：

3)  运行时间：经分析时间+再生时间 57min

4)  反应单元温度：135°C。

5)  检测波长：570nm、440nm同时检测。

三、样品中氨基酸含量的计算

样品测定液氨基酸的含量按式(2)计算:

ci = cs /As ×Ai ·····················(2)式中:

ci ———样品测定液氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

Ai ———试样测定液氨基酸i的峰面积;

As ———氨基酸标准工作液氨基酸s的峰面积;

cs ———氨基酸标准工作液氨基酸s的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL)。

试样中各氨基酸的含量按式(3)计算:

Xi = (ci ×F ×V ×M)/ (m ×109) ×100······(3)式中:

Xi ———试样中氨基酸i的含量,单位为克每百克(g/100g);

ci ———试样测定液中氨基酸i的含量,单位为纳摩尔每毫升(nmol/mL);

F ———稀释倍数;

V ———试样水解液转移定容的体积,单位为毫升(mL);

M ———氨基酸i的摩尔质量,单位为克每摩尔(g/mol);

m ———称样量,单位为克(g);

109 ———将试样含量由纳克(ng)折算成克(g)的系数;

100 ———换算系数。

附、花鲳分析图谱及做样结果