蓄能|2020药典特色双三元液相轻松实现维生素D测定新增第四法

2020-08-14 02:36:59, 飞飞赛默飞色谱与质谱分析

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史华进沈国滨金燕

《中国药典》四部通则《0722 维生素D测定方法》中采用高效液相色谱法测定维生素D及其制剂、维生素AD制剂或鱼肝油中所含维生素D及前维生素D经折算成维生素D的总量。

2015版《中国药典》中该测定方法包括三个方法，第一法主要针对无维生素A醇和其他成分干扰的供试品，不满足一法条件的供试品可采用二法；若供试品按二法处理后，前维生素D仍受杂质干扰，则应按第三法测定。其中二法和三法供试品制备都需要经过复杂的皂化，水洗，萃取，浓缩等工序，前处理过程相当费时费力。

2020版药典《0722 维生素D测定方法》在2015版基础上新增了第四法。该法采用二维液相色谱，供试品无需经过复杂处理即可进样分析，大大节省了样品前处理的时间。

早在2010年，赛默飞技术支持团队就已经和相关食品药品检验院所合作，并共同探讨研究采用二维液相色谱技术测定维生素D的方案，并结合双三元液相色谱仪器开展相关实验。据悉，此次第四法的部分复核单位也使用了赛默飞双三元液相仪器对方法进行复核。

赛默飞双三元液相色谱仪

双三元液相

轻松实现维生素D检测第四法

赛默飞液相应用团队在第一时间采用双三元液相重现了2020版药典四部通则《0722 维生素D测定方法》第四法，使用的一维色谱柱为推荐的赛默飞品牌 Acclaim™系列HILIC-10色谱柱。

表1. 双三元二维液相色谱条件

图1. 双三元二维液相系统连接示意图

图2.对照品溶液一维色谱图（上）和二维色谱图（下）

表2. 对照品溶液一维色谱结果

由图2及表2可见，采用双三元液相色谱测定维生素D，前维生素D和维生素D的分离度为9.0，满足药典分离度大于5的要求，两个峰的理论塔板数分别为10003及9164，均远大于药典要求的2300。

图3. 某维生素D滴剂供试品一维色谱图（上）

和二维色谱图（下）

图3显示该维生素D滴剂供试品一维色谱中，前维生素D 受杂质干扰，与杂质分离度不佳，维生素D的峰形较宽。经过二维色谱后，前维生素D与杂质达到分离，两个峰的峰形收窄，更利于维生素D的定量。

图4.对照品溶液连续进样一维色谱叠加图（n=4）

实验中对维生素D第四法方法的重现性做了考察，结果显示连续进样4针，前维生素D及维生素D的保留时间RSD分别为0.20%及0.22%，峰面积RSD分别为0.73%及1.25%。充分体现了双三元液相两泵的优良性能及整个液相系统的稳定性。

使用双三元液相可以轻松实现2020版《中国药典》新增的维生素D测定第四法，助力相关企业快速应对新法实施。

科普小贴士

早在2006年，赛默飞就推出了双三元液相，一经推出便得到行业内一致好评，并获得当年匹兹堡金奖。其采用独特的双泵设计，每一个泵都可以独立工作，有各自独立的流动相比例阀和流动相进出系统，可以同时单独控制三种不同的流动相来进行复杂的样品分析。双三元梯度系统具有独特的阀切换系统，柱温箱部分放置的两个切换阀可以通过变色龙软件的控制在相应的时间进行阀切换，实现流动相流路和色谱柱连接的不同组合切换。

2020版药典四部通则0512高效液相色谱法中还首次引入了多维液相色谱（单中心切割、多中心切割和全二维色谱）的介绍，可见，二维/多维液相色谱技术也逐渐被广大客户所接受。除了经典的Ultimate3000平台，双三元技术同样也适用于Vanquish平台，Vanquish Duo产品也可以实现二维/多维色谱功能，以及与液质联用在线除盐，Online-SPE（在线固相萃取），串联及并联液相等多种高级功能，灵活拓展实验室能力。

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