2天变1小时？看视频，学顶尖实验室N-糖样品制备法

2020-07-15 05:33:52, 安捷伦科技 安捷伦科技（中国）有限公司


为什么 N-糖表征对生物治疗蛋白开发过程至关重要？
N-糖的结构可影响治疗性蛋白质（如单克隆抗体（mAb）和 Fc 融合蛋白）的免疫原性、药代动力学和药效学，是公认的关键质量属性（CQA）、生物治疗蛋白开发的关键点之一。
您所采用的 N-糖样品制备流程，
难 or 易，2 天 or 1 小时？
N-糖的样品制备方法有很多，难易程度、所需时间的差别极大，如图 1 所示。安捷伦均可对这几种样品制备方法提供相关支持，以满足您 LC / FLD / MS 和 CE 工作流程的不同需求。
图 1. N-聚糖样品制备时间的演变
N-糖样品制备，从2 天缩短至 1 小时，
顶尖实验室的秘诀你值得拥有
秘诀就在于安捷伦最新产品 — Gly-X 平台。Gly-X 平台可将样品制备时间从 2 天缩短至 1 小时：它所使用的 PNGase F 酶解和 InstantPC（一种具有高 FLD 和 MS 信号的糖基胺标记染料）标记仅需 5 分钟。

您可以通过本期视频了解该产品是如何推动您的糖蛋白分析、达到更高效率水平。

本视频由于拍摄条件有限，非专业之处还望谅解。此外，建议在 wifi 条件下观看。
除此以外，Gly-X 平台还可以使用 2-AB 和 APTS 进行标记，其工作时间约为 2 小时，具体操作步骤视频我们将在下期视频中介绍。
操作视频核心信息梳理
N-糖分析前处理流程
图 2. Gly-X N-聚糖样品制备工作流程，推荐的起始样品量为 1 至 40μg
通过视频我们可以发现整个前处理流程十分便捷：3 分钟变性，5 分钟酶切，1 分钟标记，1 小时内即可完成所有前处理。
使用 Gly-X InstantPC 标记的第三代前处理技术，相较传统 2-AB 标记的第一代前处理技术在效率上提升了近 50 倍。在前处理过程中也有如下几点小技巧有助于实验顺利进行：
  • 如在变性过程中出现沉淀，务必重新配置蛋白样品溶液；标记后如出现沉淀，则为正常现象
  • 在净化 Wash 和 Elute 过程中需注意压力控制，一般使用 2 inHg，因此建议使用负压装置，而非正压装置来保持压力

  • 整个前处理步骤，除了需要 Gly-X 试剂盒，还需搭配负压装置、真空泵等一起完成

N-糖表征效果
使用 AdvanceBio 糖谱柱分析 InstantPC 标记的 N-糖样品，荧光响应和质谱响应相较 2-AB 标记提升了近 10 倍（如图 3 ）。
图 3. N-糖标记的 FLD（A）和 MS（B）响应的比较。用 InstantPC、RapiFluor-MS、普鲁卡因酰胺和 2-AB 标记等量糖蛋白样品中的聚糖，并通过 UHPLC 测量。柱状图代表 G0F N-聚糖种类的峰面积。
图 4. 安捷伦 N-糖工作流程

操作视频中所示消耗品
安捷伦 N-糖工作流程所需消耗品
注：所示产品包装正在更新中，最终包装式样以到货为准。

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