水中抗生素类药物的测定

前言

近日，一篇关于《长江流域抗生素污染调查》的报道，长江流域抗生素浓度偏高，水生态系统受到破坏，相关调查显示，长三角约40%孕妇尿液中检出抗生素，近80%儿童尿液中检出兽用抗生素，部分检出抗生素已在临床中禁用，有可能严重损害人体免疫力。因此抗生素类药物的检测与监控越发重要。

对于水中抗生素类药物检测，固相萃取技术越来越多地得到应用，莱伯泰科公司拥有多年相关产品和技术的开发、推广和应用经验。本文使用莱伯泰科 SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中四环素类、头孢类和磺胺类的萃取净化，并用高效液相色谱进行检测，通过SPE1000全自动固相萃取系统建立的方法加标回收率良好，适合水源水中抗生素类药物的检测。

一、水中四环素类抗生素的检测方法

1仪器设备及试剂

1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

M64 高通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；

LC600 二元高压梯度高效液相色谱（莱伯泰科公司）；

固相萃取柱HLB 500 mg/6 ml （莱伯泰科公司）。

1.2试剂

甲醇、乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；

草酸、盐酸（分析纯）；

Mcllvaine 缓冲溶液：将1000ml 0.1mol/L 的柠檬酸溶液与625mL 0.2mol/L 磷酸氢二钠混合；

0.1mol/LNa2EDTA-Mcllvaine 缓冲溶液：称取60.5g 乙二胺四乙酸二钠放于1625mL Mcllvaine 缓冲溶液中，溶解，摇匀；

土霉素、四环素、金霉素标准物质：纯度>=95%；

土霉素、四环素、金霉素混合标准储备溶液：准确称取提土霉素、四环素、金霉素各 10mg，用甲醇定容至100ml 容量瓶中（100mg/L，甲醇）；

2实验过程2.1样品预处理

采集每500mL 水源水作为一个样品，装入SPE1000样品瓶中 ，加入250mgEDTA-Na2，20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。

洗脱液收集到收集瓶中，用M64 40℃ 5psi浓缩后，用流动相定容至1mL，涡旋混匀，待检测。

图1土霉素、四环素、金霉素固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；

流动相：乙腈：甲醇：0.01mol/L草酸溶液=2:1:7；

流速：0.5mL/min；

紫外检测波长：214nm；

柱温：30℃；

进样量：20μL。

3 实验结果3.1土霉素、四环素、金霉素混标液相色谱图

图2为三种混标液相色谱图。

图2  5mg/L土霉素、四环素和金霉素液相色谱图

3.2空白样品液相色谱图

图3为空白样品液相色谱图。

图3  空白样品液相色谱图

3.3加标回收率

图4为加标样品液相色谱图，加标回收率结果如表1所示。

图4  加标样品液相色谱图

表1加标回收率结果

4 结果与讨论

本文使用SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中土霉素、四环素、金霉素的净化，经M64氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测，加标回收率为79.3%-84.7%，RSD为4.5%-6.4%，适合水源水中土霉素、四环素、金霉素的检测。

二、水中磺胺类抗生素的检测

1 仪器设备及试剂

1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

M64 高通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；

LC600 二元高压梯度高效液相色谱（莱伯泰科公司）；

固相萃取柱HLB 500 mg/6 ml （莱伯泰科公司）。

1.2试剂

甲醇、乙腈（色谱纯 FISHER Chemical）；

乙酸、盐酸（分析纯）；

0.3%乙酸水溶液（体积分数）；

流动相：0.3%乙酸水溶液：乙腈=7:3（体积比）；

磺胺类药物标准液：磺胺嘧啶（100μg/mL，甲醇），磺胺二甲基嘧啶（100μg/mL，甲醇），磺胺甲恶唑（100μg/mL，甲醇）；

2 实验过程2.1样品预处理

采集每500mL 水源水作为一个样品，装入SPE1000样品瓶中，加入250mgEDTA-Na2，20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。

洗脱液收集到收集瓶中，用M64  40℃ 5psi浓缩后，用流动相定容至1mL，涡旋混匀，待检测。

图1磺胺类抗生素固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；

流动相：流动相：0.3%乙酸水溶液：乙腈=7:3；

流速：1.0 mL/min；

紫外检测波长：272nm；

柱温：35℃；

进样量：20μL。

3 实验结果3.1磺胺类药物标样液相色谱图

图2为100ng/mL的磺胺类药物标样的液相色谱图。

图2 100ng/mL的磺胺类药物标样液相色谱图

3.2空白样品色谱图

图3为空白样品的色谱图，在磺胺类药物的出峰时间处没有响应，说明该样品中磺胺类药物未检出。

图3 空白样品色谱图

3.3加标样品色谱图

图4为加标样品的色谱图。

图4 加标样品色谱图

3.4加标回收率结果

表1为加标回收率结果，6个平行样的回收率为79.9%~87.1%，RSD为3.2%~6.7%。

表1加标回收率结果

4 结果与讨论

本文使用SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中磺胺类药物的萃取，经M64氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测，加标回收率为79.9%~87.1%，RSD为3.2%~6.7%，适合水源水中磺胺类药物的检测。

三、水中头孢类抗生素的检测

1 仪器设备及试剂1.1仪器设备

SPE1000全自动固相萃取系统（莱伯泰科公司）；

M64 高通道平行浓缩仪（莱伯泰科公司）；

LC600 二元高压梯度高效液相色谱（莱伯泰科公司）；

固相萃取柱HLB 1000 mg/6 ml （莱伯泰科公司）。

1.2试剂

甲醇（色谱纯 FISHER Chemical）；

乙酸（分析纯）；

0.1%乙酸水溶液（体积分数）；

流动相：0.1%乙酸水溶液：乙腈=65:35（体积比）；

头孢克洛标准液：100μg/mL，甲醇；

2 实验过程2.1样品预处理

采集每200mL 水源水作为一个样品，装入SPE1000样品瓶中，加入250mgEDTA-Na2，20%盐酸调节PH约为2 。

2.2 SPE富集及浓缩

按照图1所示方法进行样品的SPE净化。 

洗脱液收集到收集瓶中，用M64 40℃ 5psi浓缩后，用流动相定容至1mL，涡旋混匀，待检测。

图1头孢克洛固相萃取方法

2.3高效液相色谱检测条件

色谱柱：C18，柱长250mm，内径4.6mm，粒径5μm，或性能相当者；

流动相：A-0.1%乙酸水，B-甲醇，A:B = 65:35；

流速：0.5mL/min；

紫外检测波长：254nm；

柱温：30℃；

进样量：20μL。

3 实验结果3.1头孢卡洛标样液相色谱图

图2为10ng/mL的头孢卡洛的液相色谱图。

图2 10ng/mL头孢卡洛标样液相色谱图

3.2加标回收率结果

表1为加标回收率结果，6个平行样的回收率为87.5%，RSD 为7.1%。

表1加标回收率结果

4 结果与讨论

本文使用SPE1000全自动固相萃取系统进行水源水中头孢卡洛的萃取净化，经M64氮吹浓缩后用高效液相色谱进行检测，加标回收率为87.5%，RSD为7.1%，平行性良好，适合水源水中头孢类抗生素的检测。