【色谱学堂第二讲】使用Quasar表面多孔颗粒亲水性相互作用液相色谱柱对水溶性维生素进行分析

1990 年，Alpert 首次提出了亲水性相互作用液相色谱(HILIC)法。此方法提供了一种在极性固定相上有效地分离小极性化合物的替代方法。小极性化合物在反相条件下不能很好地保留³。在亲水性相互作用液相色谱柱中，水是最强的溶剂；由于流动相通常含有少量的水，因此，这种方法非常适用于质谱检测法。

本文简要介绍了使用 Quasar SPP HILIC 色谱柱的亲水性相互作用液相色谱模式有效分离维生素 B2 和维生素 B3（图 1）。

图1.维生素 B2 和维生素 B3 的化学结构。

所有高效液相色谱法的参数如表1 所示。

表1.高效液相色谱法的参数。

所有溶剂均为高效液相色谱级的溶剂，并且所有样品都采用0.45µm 尼龙过滤器（零件号：02542880）进行过滤。

所有极性色谱表面都可以用于亲水性相互作用液相色谱分离。典型的亲水性相互作用液相色谱柱的固定相由常规的裸二氧化硅或经极性官能团改性的二氧化硅组成。亲水性相互作用液相色谱法是正相(NP)、反相(RP)和离子色谱技术的混合体（图 2）。反相洗脱液与正相的固定相和离子色谱法的带电分析物相结合，产生了亲水性相互作用液相色谱法的基础。诸多文献都已经讨论过此方法的分离机制，但是人们普遍认为：极性固定相（而非缺水的流动相）上会形成一层富含水的表层，从而产生液体/液体隔离。然而，这种分离机制比单独的隔离更复杂，使用偶极-偶极相互作用和静电相互作用可以加强保留。

图2.亲水性相互作用液相色谱法是一种混合技术。

极性较大的化合物与固定相液体层之间的相互作用更强， 因此，其保留时间比极性较小的化合物要长。洗脱顺序与反相高效液相色谱中观察到的顺序相反。

维生素 B2 和维生素 B3 含有几种极性官能团，这些极性官能团可以处于带电状态，并利用烷基链键合相和传统的反相分离，使保留变弱。因此，它们非常适合使用亲水性相互作用液相色谱法进行分离。如图3 所示，在亲水性相互作用液相色谱法模式下，这些极性化合物能够轻松保留，而维生素 B2 在维生素 B3 之后洗脱，因此， 它的极性更强。

图3.(i)维生素 B2 和(ii)维生素 B3 的高效液相色谱分析图。

与传统的多孔二氧化硅色谱柱相比，采用表面多孔颗粒相的实心核和多孔二氧化硅外涂层可以将成本降低50%，并将效率提高50%。

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