2019-02-13 15:12:34 SCIEX
胶类药材是具有典型民族特色的传统中药,是由动物皮、甲、角等为原料,加工而成的明胶类物质,常见的有阿胶、龟甲胶、鹿角胶。近年来,由于动物胶类药材的生产原料短缺,价格昂贵,一些不法企业为降低成本,就开始用下脚料甚至不明来源的皮革制胶,同时在高价胶类药材(龟甲胶及鹿角胶)生产过程中掺入低价胶类(阿胶或明胶)的情况屡见不鲜,导致胶类药材的质量参差不齐、市场比较混乱。
为了保障人民用药安全有效、保护消费者利益,由国家食品药品监督管理部门批准颁布实施的2015年版《中国药典》中,明确规定了高灵敏度、高特异性的液相色谱-质谱联用方法进行阿胶、龟甲胶、鹿角胶的鉴别[1~3]。同时,2014年国家食品药品监督管理局药品补充检验方法[4]中明确规定了龟甲胶和鹿角胶要检查牛皮源成分和驴皮源成分的限量,早在2012年就颁布了“阿胶中牛皮源含量的补充检验方法”,明确规定了阿胶样品中牛皮源特征肽A含量不得超过0.3ug/ml。
本实验参照2015年版《中国药典》中规定的胶类检测方法,使用胰蛋白酶对胶类药材进行酶解,利用高效液相色谱-三重四极杆质谱联用仪,通过多反应监测(MRM)方法,对阿胶、龟甲胶、鹿角胶药材专属的特征成分进行了检测。
并将上述胶类以及牛皮源特征肽A的特异性离子对整合到一个液质联用方法中。实现了一个方法能检测药典中规定的各种胶类。在不影响分离效果的前提下,采用了较快速的液相洗脱梯度,节省了仪器分析时间。
1
仪器与材料
SCIEX API 3200三重四极杆质谱仪。
阿胶(批号:121274-201202)、龟甲胶(批号:121693-201301)、鹿角胶(批号:121694-201301)、黄明胶(批号:121695-201301)对照药材以及牛皮源特征肽A标准品(11941-201202均由中国食品药品检定研究所提供。分析用样品由湖北康源药业有限公司提供。
2
方法与结果
2.1 液相条件
色谱柱:C18,2.1x150mm,3µm
流动相: A:0.1%甲酸水溶液 B:乙腈
流速:0.3mL/min,梯度洗脱,梯度条件见表1。
柱温:40℃
进样量:5µL
表1. 梯度洗脱条件
2.2 质谱条件:
ESI+ 正离子模式
气帘气CUR:20psi
碰撞气CAD:6
雾化气GAS1:60psi
辅助气GAS2:50psi
IS电压:5500V
源温度:600℃
扫描方式:MRM,相应的离子对信息及相应的参数见表2。
表2. MRM离子对及相应的参数
2.3 对照药材溶液、以及样品的制备
分别取阿胶、黄明胶、鹿角胶、龟甲胶对照药材和相应的样品各0.1g,按照《中国药典》2015年版【1-3】中鉴别项下的方法,以及由国家食品药品监督管理部门批准颁布胶类药材补充检验方法【4】中的样品制备方法,进行提取和酶切。制备对照药材溶液和样品溶液。
2.4 结果
通过上述液相色谱-质谱联用方法,一次进样,同时检测8个MRM离子对,对各样品分别进样分析,结果表明:阿胶、鹿角胶、龟甲胶各化合物检测离子对MRM色谱峰的信噪比(峰峰比)远高于2015版《中国药典》中规定的信噪比3:1,牛皮源特征肽A 以及黄明胶对照药材中的成分,信噪比均大于10:1和3:1,完全满足检测要求。代表性的色谱图见图1和图2。
分别对阿胶、鹿角胶、龟甲胶样品进行了测试,在阿胶样品中检测到阿胶特征成分,而没有检测到牛皮源特征肽A,鹿角胶中也分别测得相应的特征性成分,而没有检测到牛皮源成分和驴皮源成分,产品质量符合规定。代表性色谱图见图3和图4。
图1. 对照药材溶液
A阿胶;B 龟甲胶;C 鹿角胶
a: m/z 539.8/612.4; b: 539.8/923.8;
c: 621.3/546.4; d: 631.3/921.4;
e: 765.4/554.0; f 765.4/733.0
图2. 对照品溶液
A牛皮源特征肽A B黄明胶对照药材
a: m/z 641.3/783.3; b: 641.3/726.2
图3. 药材样品溶液
A阿胶药材 B鹿角胶药材
图4. 龟甲胶样品
3
结论
采用API 3200 液质联用系统,针对2015年版《中国药典》中规定的阿胶、鹿角胶、龟甲胶三种药材的定性鉴别试验进行了方法的建立和测试。结果表明,API 3200建立的测试方法中,信噪比均远远高于药典中规定的阿胶、鹿角胶、龟甲胶的信噪比,完全满足药典的要求。
同时也建立了阿胶中牛皮源含量测定,以及龟甲胶、鹿角胶中牛皮源成分和驴皮源成分测定的方法,满足国家食品药品监督管理局2012年、2014年颁发的补充检验方法的规定。为阿胶、龟甲胶、鹿角胶的质量控制提供给了科学、准确的试验数据和依据。
此外,药典中的液相梯度采用的是40min,在本实验中,仅用20min就完成了测试,节省时间、提高检测通量。
4
参考文献
【1】《中国药典》2015年版第一部 189页。
【2】《中国药典》2015年版第一部 181页。
【3】《中国药典》2015年版第一部 322页。
【4】国家食品药品监督管理总局药品补充检验方法
http://www.nicpbp.org.cn/CL0829/
寻求科学的答案,探索生命的奥秘
微信号:ABSciex-China
06-27 福立仪器
好礼来袭 | 分享您身边的特洁安身影06-27
大盘取厚势 落子开新局:战略聚焦开启品牌发展新篇章——访Veralto大中华区总裁秦晓培06-27 星羽
实验操作 | 质粒构建、转化、提取、鉴定、转染、测定(完整版)06-27 小 M
有投必奖 | 大家都用 MCE 产品做了啥? (感染领域)06-27 小 M
科研助攻 | 一文讲清:如何破解 PPI 靶点成药难题06-27 小 M
干货分享 | 谈谈天然产物的改构策略06-27 小 M
玉研口鼻暴露系统 | 精准、可控、高通量的动物肺部疾病造模工具,助力创新药物研发06-26 玉研仪器
高分离 高灵敏 高通量——福立液相LC5190重新定义分离需求06-26 福立仪器
医药行业指南:电位滴定仪选型攻略来啦~06-26
屹路同行 悦启新程06-26 屹尧科技
徕卡精准空间生物学解决方案 第四弹06-26 童昕、南希
【直播预告】第一届大湾区生物电镜制样讲习班06-26 徕卡显微系统
徕卡常规显微镜历经严苛的ISO9022标准测试06-26 徕卡显微系统
Viventis LS2 Live 光片显微镜发布会06-26 徕卡显微系统
前沿应用 | 经皮无创血糖检测中葡萄糖拉曼峰直接观测06-26 鉴知技术
SNEC光伏展圆满落幕 | OTT HydroMet闪耀时刻精彩回顾06-26 OTT HydroMet
激光指向稳定在光刻系统应用中的关键作用,及其优化方案!06-26 圈内人都会关注
推陈出新!通微公司携新品亮相本届CPHI06-26 Unimicro
远离氟污染!开启无氟接触前处理技术新篇章06-26