“师兄救我” 蛋白-小分子互作实验遇难? MST助你满血复活

“师兄救我！这课题跟天书似的，我压根不知道从哪下手。”

“慌啥，又不是让你造火箭。我教你两招，先说说你实验要干啥？”

“老师让我验证几个小分子和蛋白靶点的互作关系。”

“我用MST技术做过类似的课题，特简单，估计你这周就能搞定！”

“真的吗？用这个技术，我首先需要准备什么？”

“你先看这2个视频，搞懂原理和基本操作。NanoTemper资源库，收藏这个小程序，里面也有教学视频用来指导。”

“视频看完了，都是基础的简单操作，我没问题！”

“蛋白当Target，小分子当Ligand，那Target蛋白该怎么准备呢？”

“分两种情况：要么自己纯化蛋白，要么买重组蛋白；要是蛋白不好纯化或者纯化后不稳定，可用细胞裂解液。”

“纯化蛋白得准备多少？咋标记啊？”

“准备10uM、100uL的蛋白就行。没标签的蛋白用MO-L011氨基标记试剂盒，有标签蛋白，可以根据标签选择标记试剂盒，如His-tag可以使用MO-L018标记试剂盒，也可以选择融合荧光蛋白表达。

“我有好几个配体小分子，难道要标记好几次？”

“不用，氨基标记好的蛋白，能测20-30个配体，效率非常高。”

“那太方便了！”

“师兄，还有Target蛋白和Ligand的浓度怎么定？”

“Target浓度要低于预期K_d，还得符合仪器荧光要求，一般从20nM开始试。Ligand浓度得准，最高浓度是预期K_d的50倍。你点这个小程序链接看一下NanoTemper资源库”

“东西我都准备好了，样品怎么配？”

“梯度稀释Ligand，将Target蛋白与之混合！这篇推文有介绍标准方法FAQ系列1_Ligand梯度稀释，你看看。”

“上机的时候，你有空带我不？”

“Monolith超简单，你自己来就行。毛细管吸样品放样品台，软件填好信息点【Start】，10分钟就能出分析数据。你看这个操作视频，完全可以独立完成。MST实验常见答疑，还可以点击这里看看MO_FAQ”

“这么方便简单，我要去试试了！”

“对了，实验做完仪器不用清洗，把样品拿走，关舱门关机就行。祝你实验顺利，期待你的好结果！”

“谢谢师兄，您和MST技术，让我对课题的信心又重新满血复活了！”