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逆转录病毒 (Retrovirus) 是一类已知的RNA病毒。需在逆转录酶的作用下首先将RNA转变为cDNA,再在DNA复制、转录、翻译等蛋白酶作用下扩增的一类病毒。该载体系统有两部分组成,一是带有外源基因的重组反转录病毒载体分子,二是能以反式提供病毒结构蛋白的包装细胞,其要求是能高效产生感染靶细胞的重组病毒颗粒,且无野生型的反转录病毒存在,后者是基因治疗安全性的关键问题。
1.1逆转录病毒载体zei大优点是:
1.1.1转染范围广,可以感染各种细胞类型,如淋巴细胞或肝细胞、肌细胞等;
1.1.2 转入的外源基因可完全整合;
1.1.3对细胞感染率高,
1.1.4感染细胞不产生病变,可建立细胞系长期持续表达外源基因。
1.2逆转录病毒载体的不足之处,如:
1.2.1只能整合至分裂期细胞;
1.2.2可插入外源基因片断小(<10kb),难以满足较大基因的插入;
1.2.3病毒滴度是限制临床应用的主要方面;
1.2.4有产生野生型病毒或辅助型病毒的可能,随机整合可能产生不良作用。
包装过程:
1)重组逆转录表达载体的获得及鉴定
2)包装细胞PT67的解冻培养
3)重组表达载体转染包装细胞PT67细胞
4)稳定产病毒的包装细胞的筛选
5)转染的包装细胞稳定地产病毒及病毒滴度的测定
逆转录病毒包装,
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