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表皮细胞培养1.取材:取外科植皮或手术残余皮肤小块,以角化层薄者为佳,早产流产儿皮肤更好,切成0.5~1 平方厘米小块。2.EDTA 处理:先置入0.02%EDTA 中室温置5 分钟。3.冷消化:换入0.25%胰蛋白酶中,置4℃过夜。4.分离:取出皮肤,用血管钳或镊子把表皮与真皮层分开。5.温消化:取出表皮单独处理,用剪刀剪成更小的块后,置入新的0.25%胰蛋白酶中,37℃再消化30~60 分钟。6.用吸管轻轻反复吹打,使成细胞悬液。7.培养液:通过80 目不锈钢纱网滤过后,低速离心,吸上清,直接加入Eagle液和20%小牛血清,制成细胞悬液,接种入碟皿中,CO2 温箱培养。
无菌操作的注意事项:
细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯杀菌1h,操作前用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上口罩和帽子,操作时不能大声说话,双手戴上一次性橡胶手套,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。
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