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细胞系基因靶向操作服务
基因敲除敲入技术一直是研究特定基因功能的有效工具。沐赛生物利用zei新的CRISPR/Cas系统可以有效的实现对细胞系特定基因的敲除和定点突变。
技术原理
ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeats(CRISPR)/Cas是细菌和古细菌不断进化而获得的免疫防御机制,其中II型CRISPR/Cas免疫系统依赖Cas9内切酶家族靶向和剪切外源DNA。CRISPR/Cas9系统通过小导向RNA(sgRNA)对切割区域进行识别,进而利用Cas9内切酶实现靶向区域的切割以产生DNA双链断裂。该系统灵活简单,可实现多个靶点的同时操作。目前我们采用DoubleNicking技术,显著降低脱靶率。
我们利用该技术,定点敲除和修饰各种细胞系中的特定基因。对打靶细胞进行药物筛选,利用CRISPR/Cas系统获得的基因敲除细胞的剔除效率会明显高于常规的利用RNAi和shRNA介导的基因敲落。
技术特色
1.可实现多个靶基因位点及多个基因的同时敲除
2.zei新Nickase酶/双gRNA技术,显著降低脱靶率
3.无种属限制,适用于各种细胞系的靶向敲除
4.服务周期短,2个月即可交付阳性细胞
服务流程及周期
靶向目标序列gRNA的设计及载体构建
目标细胞系共转染
阳性细胞株的筛选和鉴定
应用范畴
基因功能分析:在细胞水平研究基因的功能
定点突变::建立点突变细胞,可用于药物靶点研究。
启动子功能分析:该方法建立的启动子分析系统,可有效地分析内源性启动子的强度,是一种最理想的分析系统。
威斯腾实验服务流程
威斯腾生物服务项目
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