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内皮细胞培养
1.取产后的新鲜脐带。如不立即培养可以保存于4℃中,但不宜超过12 小时。无菌剪取长10~15 厘米一段。其它如胚胎和幼体动物的大血管,亦可用于培养。2.先用三通注射器吸温PBS 液注入脐带的静脉中,洗除残血,注入口处宜用线绳结扎,以防液体返流。3.用血管钳夹紧脐带一端,从另端向脐静脉中徐徐注入最终浓度为0.1%的胶原酶,待末端出现液体后结扎之,令充满血管,注入口亦应结扎,以防液体返流,消化3~10 分钟。4.吸出含有内皮细胞的消化液,注入离心管中,为获取更多细胞,可再注入温PBS 冲洗2~3 次彻底清除干净残余细胞,一并注入离心管中离心。5.吸除上清,加1640 培养液,制成细胞悬液,接种入瓶皿中培养,顺利时2~3 天内细胞即可长成单层。
无菌操作的注意事项:
细胞原代培养一定要保持工作区的无菌清洁,先用紫外灯杀菌1h,操作前用75%乙醇消毒,穿上实验服,戴上口罩和帽子,操作时不能大声说话,双手戴上一次性橡胶手套,整个无菌操作都应该在酒精灯的周围进行。
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