蛋白质非标记定量技术(Label-free)是通过液质联用技术对蛋白质酶解肽段进行质谱分析,无需使用昂贵的稳定同位素标签做内部标准,只需分析大规模鉴定蛋白质时所产生的质谱数据,比较不同样品中相应肽段的信号强度,从而对肽段对应的蛋白质进行相对定量。Label-free的技术优势就在于蛋白质不需要进行标记,所需样品总量少,耗费低。
技术原理
非标记定量蛋白质组学近年来成为重要的质谱定量方法,按照其原理分,主要有两种。其中spectrum
counts类的非标记定量方法,发展比较早,也形成了多种算法进行定量,但是主要的原理都是根据MS2的鉴定结果作为定量的基础,各种方法的差别在于后期算
法在大规模数据上的修正。第二种非标记定量方法的原理是以MS1为基础,计算每个肽段信号在LC-MS质谱上的积分(峰面积)。
Label free流程图
技术优势
1.无需昂贵的同位素标签标记,实验耗费少,操作简单;
2.对样本的操作少,并且不受样本数目限制
3.可以检测到的肽段动态范围可以达到4个数量级以上,提高低丰度蛋白的检出率和非标定量的准确性;
4.可以检测不同组样本中有无差异的蛋白变化;
5.样本需求量少
应用范围
基础医学、临床诊断:生物标志物,疾病机理机制,疾病分型,个性化治疗等;
生物医药:药物作用机理,药效评价,药物开发等;
微生物领域:致病机理,耐药机制,病原体-宿主相互作用研究等;
海洋水产:渔业资源,海水养殖,渔业环境与水产品安全等;
食品营养:食品储藏及加工条件优化,食品组分及品质鉴定,功能性食品开发,食品安全监检测等。
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