液相色谱仪纳升级UHPLC赛默飞 基于二氧化钛富集策略的人类磷酸化蛋白质组大规模鉴定(赛默飞)

赛默飞液相色谱仪EASY-nLC 1200可用于测定磷酸化蛋白质组，适用于磷酸化蛋白质组项目。并且参考多项行业标准Zanivan, S., et al., Solid tumor proteome and phosphoproteome analysis by high resolution mass spectrometry. J Proteome Res, 2008. 7(12): p. 5314-26.。可应用于蛋白行业领域。

    在这部分工作中，我们采用了高 pH 反相色谱结合二氧化钛富集以及二氧化钛富集结合强阳离子交换分级两条技术路线来对实现对 Hela 细胞的磷酸化蛋白质组的深度覆盖。最终我们的实验一共鉴定到了 8,696 个蛋白质上的近 40,000 个磷酸化位点。
    在二氧化钛富集结合强阳离子交换分级的技术路线中，SCX 分级的梯度还值得进一步优化，对于这种组分较少的预分级方法，阶梯洗脱会是一个更好的选择。这种大规模的磷酸化肽段富集方法对样品的起始量要求比较高，如果样品较少的话，建议采用二氧化钛富集结合强阳离子交换的策略，一般 2 mg 起始蛋白就能得到较多的磷酸化位点鉴定。ThermoFisher也提供了商业化的 IMAC 试剂盒（Cat # 88300），鉴于 IMAC 和 TiO2 对磷酸化肽段富集有着较好的互补性，这两者联用会对磷酸化蛋白质组的深度覆盖达到更好的效果。

· 高级流速控制（AFC）保证流速的精度，提供出色的样品间重复性

2. 内置计算机& 维护

· 自动检漏表明实际泄漏的位置

·  进样前自动气泡检测，防止损失样品

· 系统背压测试快速检测流路阻塞情况

· 自动化的内置维护步骤

· 通过网络远程访问，解决系统问题

· 疑难问题的事件日志

·  系统定期维护时间提醒

3. 集成设计

· 设计结构有利于组件更换

· 无脉冲泵zei大程度减少密封垫、阀门和接头的更换

· 软件利用优化的流动路径

·  使用免维护切换阀，无需更换转子

4. 稳定的无脉冲梯度

· 工厂配置的流动路径zei小化工作容量

· zei佳色谱准确性：不分流梯度混合，逐步控制的纳升级注射泵以及流动相的流速传感器控制

Thermo Scientific^TM EASY-nLC 1200^TM 是纳升级LC系列产品EASY-nLC家族中的zei新成员。该系统具有在更高高压（1200bar）条件下分离生物分子（比如蛋白质和肽）的独特性能。这款仪器使用极其简便，可与一系列Thermo Scientific^TM 质谱仪系统无缝连接以直接执行安全可靠的检测。

EASY-nLC 1200可以利用含1.9 μm 填料的75 cm长 UHPLC色谱柱上更短的梯度，表现了出色的分离能力，得到非常尖锐的谱峰。该系统先进的设计使其通过更高的压力以及微珠尺寸和柱长的变化，使蛋白质和肽的识别率提高了10%。而识别率的提高对于蛋白质组学研发具有非常重要的意义。EASY-nLC 1200在Thermo Scientific^TM Xcalibur^TM 软件平台上运行，可与全系列的Thermo Scientific LC-MS系统轻松连接。

EASY-nLC 1200的更高的操作压力范围显著缩短了分析周期，其设计旨在通过加速上样和柱重新平衡的过程提高分析效率。简明的一体化配置方便而耐用。

1. 高级流速控制

·  智能流速控制（IFC）加快上样和平衡的速度，并防止色谱柱阻塞

液相色谱仪纳升级UHPLC赛默飞 基于二氧化钛富集策略的人类磷酸化蛋白质组大规模鉴定,EASY-nLC 1200

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