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采用实时荧光PCR技术,针对弯曲菌特异性基因设计引物和探针。PCR扩增过程中,与模板结合的探针被Taq酶分解产生荧光信号,荧光定量PCR仪根据检测到的荧光信号绘制出实时扩增曲线,从而实现弯曲菌在核酸水平上的菌株鉴定。
1、核酸提取
加热法:刮取至少10个菌落,悬浮于100μL的无菌水中,漩涡震荡10s(如果菌落未能均匀分散,可适当延长震荡时间),95℃或沸水浴5min,冷却至室温,12000rpm离心5min,吸取上清。
试剂盒法:可使用商品化的试剂盒提取细菌的基因组DNA。
2、反应体系配置
从试剂盒中取出预混液,充分融化,涡旋后短暂离心,取20μL置于PCR管或PCR板中,然后将模板各取5μL分别加入PCR管或PCR板中(每种模板要使用四种预混液),盖好管盖或板膜,短暂离心,立即进行PCR扩增反应。
3、PCR扩增
PCR管或PCR板置于PCR仪上,推荐反应程序设定如下:反应体系为25μL,在第二步每个循环60℃时检测荧光信号,检测通道选择FAM、HEX、CY5。
第一步
第二步
1个循环
40个循环
95℃
60℃√
72℃
10min
15s
30s√
30s
注:使用ABI系列PCR仪器,如果不添加ROX,“passive reference”和 “quencher”均选择“none”。
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即将进入十一小长假“嗨玩嗨吃”状态,聚会、聚餐是少不了的。美正生物在此提醒您,在“嗨玩嗨吃”的同时也要注意一下食源性疾病风险防控哦!若不注意饮食卫生而导致出现呕吐、腹泻等症状多影响假期的节奏呀。本期跟大家分享一下烧烤、火锅、海鲜等食品的微生物风险。从微生物分布及污染途径来看“为何不同食材重点关注的微生物不同”。沙门氏菌主要污染来源:沙门菌氏广泛分布于自然界, 寄生于人和动物体内,最低生长水分活度为0.94,耐干燥,最适生长温度35℃~37℃,在20℃以上即
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