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适用范围
适用于奶粉中添加维生素B12(VB12)含量的定量分析。该试剂盒可进行96次测定。
实验原理
VB12检测试剂盒采用微生物方法定量检测奶粉中添加VB12的含量。微生物检测体系与国际规范保持一致。德氏乳杆菌的生长离不开VB12,其生长强度与样品中VB12的含量有关,将已加入德氏乳杆菌的VB12检测培养基、样品或标品加入到微孔中,37°C避光孵育,德氏乳杆菌开始生长直至VB12被完全消耗,44-48小时完成孵育。采用酶标仪读取610-630nm或540-550nm下样品的浑浊度,将样品浊度与标准曲线对比即可得到样品中VB12的含量。
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1、将所需试剂从冷藏环境中取出,置于室温(20~25℃)平 衡 30min 以上,注意每种液体试剂使用前均须摇匀。
2、取出需要数量的微孔板,将不用的微孔板放进原锡箔袋中 并且与提供的干燥剂一起重新密封,保存于 2~8℃。切勿 冷冻。
3、洗涤液在使用前也需回温。
4、编号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标 准品做 2 孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
5、加标准品/样本:加标准品/样本 50μL 到对应的微孔中,然 后加入 VB12抗试剂 50μL/孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖 板后置 25℃避光环境中反应 30min。
6、洗板:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用洗涤液 250μL/ 孔,充分洗涤 4~5 次,每次间隔 10s,用吸水纸拍干(拍 干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破)。
7、加酶标物:加入 VB12酶标物 100μL/孔,轻轻振荡混匀, 用盖板膜盖板后置 25℃避光环境中反应 15min,取出重复 洗板步骤 6。
8、显色:加入底物液 A 液 50μL/孔,再加底物液 B 液 50μL/ 孔,轻轻振荡混匀,用盖板膜盖板后置室温避光环境反应 15min。
9、测定:加入终止液 50μL/孔,轻轻振荡混匀,设定酶标仪 于 450nm 处(建议用双波长 450/630nm 检测,请在 5min 内读完数据),测定每孔 OD 值。
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