PicoGreen荧光染料 (200× in DMSO)，BioReagent,生物染色剂,适用于荧光分析,用于显微镜,≥95%

中文名：PicoGreen荧光染料 (200× in DMSO)

英文名：PicoGreen Dye (200× in DMSO)

纯度：BioReagent,生物染色剂,适用于荧光分析,用于显微镜,≥95%

货号：P1522560

存储温度：2-8°C储存,避光

产品介绍：

PicoGreen是一种特异性结合双链DNA (dsDNA) 的饱和荧光染料，激发波长为480 nm，发射波长为520 nm，与大多数荧光计和荧光酶标仪兼容。 PicoGreen仅与dsDNA结合后才发出荧光， 不受核苷酸和单链核酸的影响， 产生的荧光强度与dsDNA浓度成正比， 且无序列依赖性， 非常适合于dsDNA的定量检测， 可检出25 pg/ml~1 μg/ml浓度范围内的dsDNA。

由于PicoGreen灵敏度高、特异性强、耐受性好、无需纯化DNA，从2010版中国药典开始，已被列为生物制品DNA残留检测的标准方法之一。 根据药典说明，当dsDNA浓度在1.25 ng/ml~80 ng/ml范围内时线性最好 (R2 >0.99)。

使用方法

1. 染料工作液配制

PicoGreen原液以浓缩液形式保存在无水的DMSO (二甲基亚砜)中。实验时，一般应将原液用1× TE按1:100 的比例稀释，配制成2× 染料工作液，然后按1: 1比例与待测样品混合，使PicoGreen终浓度为1 ×。由于本试剂容易吸附到玻璃表面，应在塑料容器中配制，并注意尽量避光。染料工作液最好在配制好数小时内使用，以保证最佳结果。

2 ．实验方法

① 标准液配制：

取小牛胸腺DNA干粉1 mg (Tris, NaCl等浓度已成标准体系)，加入1 ml双蒸水，配制成1 mg/ml的标准液。

② 染料工作液配制：

取10 μl PicoGreen原液，加入990 μl 1× TE缓冲液，配制成2×染料工作液。

③ 标准品工作液配制：

a. 母液稀释：取10 μl (1 mg/ml)标准液加入到990 μl 1× TE缓冲液中， 稀释成10 μg/ml标准品工作液； 再取10 μl (10 μg/ml)标准品工作液液加入到990 μl 1× TE缓冲液中，稀释成100 ng/ml的标准品工作液。

b. 倍比稀释：取800 μl (100 ng/ml)的标准品工作液加入到200 μl 1× TE缓冲液中，浓度为80 ng/ml；再取 500 μl (80 ng/ml)标准品工作液加入到500 μl 1× TE缓冲液中，稀释到40 ng/ml；依次倍比稀释，配成20 ng/ml、10 ng/ml、5.0 ng/ml、2.5 ng/ml、1.25 ng/ml的标准品工作液。

④ 标准曲线绘制：

分别将倍比稀释后的1.25 ng/ml~80 ng/ml标准品工作液和2 ×染料工作液按1:1体积混匀 (具体体积根据荧光设备和容器的要求确定)，避光、室温放置5 min。使用荧光仪检测样品的荧光值：将混合后的溶液加入微量比色皿，注意不要在样品中引入气泡，轻弹比色皿外部以驱散气泡。以1× TE缓冲液为空白对照，设定激发波长480 nm，发射波长520 nm，在恒定温度下测定样品和空白对照的荧光值。或者使用96孔酶标板在荧光酶标仪中检测。检测结束后，以各浓度荧光值减去空白对照荧光值，再与标准品溶液浓度 (ng/ml)进行线性回归，绘制标准曲线。

⑤ 待测样品浓度测定：

将待测样品溶液和2×染料工作液按1:1体积混匀， 采用④中同样的方法，在相同温度下测定待测样品的荧光强度 (必要时先使用TE缓冲液将待测样品稀释到PicoGreen线性范围之内)，根据标准曲线的线性回归方程，计算待测样品浓度。

注意事项

1. 荧光染料均存在淬灭问题， 请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭；

2. PicoGreen工作液最好现配现用，以保证最佳结果；

3. PicoGreen荧光强度受温度影响较大，应保证绘制标准曲线和样品测定在同一恒定温度下进行；

4. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

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