产品名称：胶原酶II 来源于溶组织梭菌

规格或纯度：生物活性, ActiBioPure™, 天然, 高性能, EnzymoPure™, ≥125 U/mg enzyme powder (实测值见COA)

产品介绍：

  胶原酶（Collagenase）来源于溶组织梭菌（Clostridium histolyticum），是一种蛋白酶，能够特异性识别 Pro-X-Gly-Pro 序列并切割该序列中中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键，且该序列在胶原中出现频率很高。胶原酶是唯一可降解广泛存在于结缔组织中、具有三股螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶。
  本品为 II 型胶原酶，≥125 U/mg solid，可用于心脏、甲状腺、唾液腺、肝、骨、软骨等组织和细胞的解离。
使用方法
（一）胶原酶储存液的配制
向每管 100mg 的胶原酶中加入 1ml 含 Ca²⁺、Mg²⁺的 HBSS（Hank's 平衡盐溶液，含 Ca²⁺、Mg²⁺），轻轻旋涡震荡使其充分溶解，制备成 100 mg/ml（即 100×）的储存液。用低蛋白结合性的 0.22 μm 滤膜过滤除菌，分装成小份量，于 - 20℃避光冻存。

注：本品为粗提制品，溶解后体系中可能存在少量不溶性杂质，该类不溶物不影响产品生物活性，可正常使用。如果需要制备无菌溶液，建议先 4℃ 12000~15000 g 离心 5~10 min 取上清后再用 0.22 μm 滤膜过滤除菌或者先用 0.8 μm 滤膜过滤后再用 0.22 μm 滤膜过滤除菌，避免滤膜堵塞。
使用前于冰上解冻，避免反复冻融。常用浓度：用于组织和细胞分散的常用浓度为 0.5~2.5 mg/ml，用于软骨消化的常用浓度为 1~2 mg/ml；需根据特定实验条件或参考相应文献资料确定最佳工作浓度。
（二）组织的分离
1. 用无菌手术刀或剪刀将组织切成 3~4 mm 大小的组织块；
2. 利用含 Ca²⁺、Mg²⁺的 HBSS 洗涤组织块数次；
3. 加入足量含 Ca²⁺、Mg²⁺的 HBSS，使其浸没组织块，并加入胶原酶至所需工作浓度；
4. 于 37℃孵育 4~18 h；消化时使用水平摇床，并用 3 mM 的 CaCl₂补充消化，可提高消化效率；
5. 已分散的细胞用不锈钢或尼龙网筛筛取，收集备用；未完全解离的组织需另外添加适量新鲜胶原酶工作液，于 37℃继续孵育；
6. 利用不含胶原酶的 HBSS 洗涤收集的细胞数次；
7. 细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度；
8. 在细胞培养皿上，用合适的细胞培养基接种细胞。
（三）器官灌注
1. 向 37℃预热的含 Ca²⁺、Mg²⁺的 HBSS 中加入胶原酶；另添加 3 mM 的 CaCl₂，有助于提高分离效率；
2. 按照已优化的速率，对相应器官灌注胶原酶工作液；
3. 将上述过程中回收的灌注液流经不锈钢或尼龙网筛，分离已解离的细胞或小片段组织块与较大团块；未充分解离的组织需用新鲜胶原酶工作液于 37℃进一步孵育；
4. 利用不含胶原酶的 HBSS 洗涤收集的细胞数次；
5. 用细胞培养液重悬上述细胞，利用自动细胞计数器或其他方法计算活细胞密度；
6. 在细胞培养皿上，用合适的细胞培养基接种细胞。

生物活性：≥125 U/mg enzyme powder

Accession #：Q46085,Q9X721

级别：生物活性, ActiBioPure™, 天然, 高性能, EnzymoPure™

浓度：≥125 U/mg enzyme powder (实测值见COA)

复溶：将 100 mg 胶原酶用 1 mL 含有 Ca²⁺、Mg²⁺的 HBSS（汉克平衡盐溶液）复溶，配制成 100 mg/mL 的溶液。采用低蛋白结合型 0.22 μm 滤膜过滤除菌，分装成小份，‑20 ℃避光保存。

储存条件：2-8°C储存

运输条件：低温运输

稳定性与储存：长期储存2-8℃（24 个月）；复溶后建议分装。

CAS编号和信息：9001-12-1

酶学委员会编号：EC 3.4.24.3

单位定义：1 个酶活力单位指在 37℃、pH7.5 的条件下，5 小时内水解胶原产生 1 μmol L - 亮氨酸所需的酶量。

Accession #：Q46085,Q9X721

生物活性：≥125 U/mg enzyme powder

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