基因过表达和慢病毒构建包装纯化

一、慢病毒：
Lentivirus是逆转录病毒的一种，具有逆转录病毒的基本结构和特性；能整合入宿主细胞基因组，长期表达；但也有不同于逆转录病毒的组分和特性；比逆转录病毒具有更高的滴度，不仅可以感染分裂细胞，更重要的是还能感染非分裂的细胞。 　　利用Lentivirus构建的shRNA表达载体，与化学合成的siRNA和基于瞬时表达载体构建的shRNA相比，一方面可以替代后者，另一方面，Lentivirus-shRNA载体经包装系统包装后，可用于感染依靠传统转染试剂难于转染的细胞（如原代细胞、悬浮细胞等），并且在感染后可以整合到受感细胞的基因组，进行长时间的稳定表达，是制备稳定表达shRNA细胞株和进行体内实验(in vivo)的最有效手段。　　目前我们能够为客户提供从载体构建到慢病毒包装纯化和检测的一站式服务。

二、慢病毒载体构建包装实验流程如下：
1. 根据目的基因相关信息（序列，基因序列号等）获取目的基因；
2. 选择符合实验要求的载体；
3. 将目的基因构建到慢病毒载体获得含有目的基因的重组载体；
4. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量（不含内毒素）的重组质粒；
5. 使用高效重组载体和慢病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装并收集上清液；
6. 通过超滤和超速离心浓缩和纯化病毒；
7. 使用病毒液感染293T细胞，测定病毒滴度。 

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