稳定细胞株构建

      1.原理：

       将外源DNA克隆到具有某种抗性的载体上，载体通过慢病毒包装被感染到宿主细胞并整合到宿主染色体中，用载体中所含抗性基因进行筛选。得到可稳定表达目的蛋白，或者稳定表达沉默特定基因的细胞株。

       shRNA细胞株构建原理：短发卡RNA（shRNA）是可以克隆到表达载体并表达短的干扰RNA（sIrna,19-21个核苷酸的RNA双链）的DNA分子。我们可根据靶标设计短发卡RNA（shRNA）序列并将其克隆岛特定载体上。短发夹RNA是设计为能够形成发夹结构的非编码小RNA分子，可通过RNA干扰来抑制基因的表达。

过表达细胞株构建原理：通过人工构建的方式在目的基因上游加入调控元件，使基因可以在人为控制的条件下实现大量转录和翻译，从而实现基因产物的过表达。

       KO细胞株构建原理：基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。通常意义上的基因敲除主要是应用DNA同源重组原理，用设计的同源片段替代靶基因片段，从而达到基因敲除的目的。随着基因敲除技术的发展，除了同源重组外，新的原理和技术也逐渐被应用，比较成功的有基因的插入突变和iRNA，它们同样可以达到基因敲除的目的。

       2.技术应用

        需要长期观察外源基因表达的作用，进行长期药理学研究、基因治疗研究、遗传调控机制研究或需要进行大规模蛋白合成则需要构建稳转株。

       3.实验流程：

     4.结果展示：

                                                                                              DU145细胞荧光图                              SW480细胞荧光图

       客户提供：细胞株（冻存管/培养细胞），目的基因的质粒/菌株，目的蛋白抗体，目的基因的载体信息、细胞培养信息

       HYY提供：细胞株两管冻存管或一瓶复苏细胞，细胞株构建报告，QPCR鉴定报告，WB鉴定报告 
 

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