间充质干细胞（MSC）成骨诱导分化图/赛百慷

产品描述

试剂盒包括骨髓间质干细胞成骨诱导分化的基础培养基、优质胎牛血清及培养因子，可增强骨髓间质干细胞向成骨细胞方向诱导分化的能力，仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。

试剂盒组成成分

骨髓间质干细胞成骨诱导分化基础培养基

175mL

骨髓间质干细胞成骨诱导分化培养基专用血清

20mL

双抗

2 mL

谷氨酰胺

2 mL

抗坏血酸

400μL

β-甘油磷酸钠

2 mL

地塞米松

20μL

使用说明

成骨诱导分化完全培养基的配制

1. 使用前，请将血清置于 2-8℃环境中过夜解冻直至血清完全溶解，轻晃试剂瓶以确保血清混合均匀，血清经解冻后即可使用。
注：解冻后的血清中可能会含有少量絮状沉淀，这些物质对产品质量无影响。不建议采取直接过滤血清的方法去除沉淀物，此操作会导致血清中部分营养物质流失。
 
2. 配制前 30 min 左右，室温溶解抗坏血酸，β-甘油磷酸钠，双抗和谷氨酰胺，轻轻
 
地上下颠倒试剂管以确保试剂混合均匀。
注：在打开盖子前先短暂离心（注意配平），以确保添加试剂能全部收集。
3. 使用前 10 min，室温溶解地塞米松。
注：在打开盖子前先短暂离心（注意配平），以确保添加试剂能全部收集。
4. 用 75%乙醇擦拭试剂盒中各瓶/管的开口外壁，室温放置数秒使酒精挥发。
 
5. 在超净台中无菌地打开以上各瓶/管。
 
6. 将抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、骨髓间质干细胞专用胎牛血清、双抗和谷氨酰胺全部加入骨髓间质干细胞成骨诱导分化基础培养基中。
7. 无菌吸取少量基础培养基洗涤各瓶/管，尽可能的将所有组分完整的加入基础培养基中。
8. 最后将地塞米松加入基础培养基中，吸取 0.5 mL 基础培养基洗涤试剂管，将混合物一同加入基础培养基中。
9. 重复操作步骤 8。
 
10. 轻晃配制好的完全培养基，确保混合均匀之后即可使用。
 
注：本公司完全培养基试剂盒中的每个成分均为无菌分装，但为确保完全无菌，也可以将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌（0.22 μm 滤膜）。

培养器皿表面的基质胶包被

为了避免诱导过程中间质干细胞出现漂浮现象，建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行基质胶包被。

所需材料

基质胶溶液操作

1. 加适量 100X 基质胶到培养器皿中，能覆盖整个培养器皿底面的量即可。

2. 摇匀液体使其覆盖整个培养器皿的底面。

3. 将铺有基质胶的培养器皿放置在超净台至少 30min。

4. 30 min 后弃去基质胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

注： 包被基质胶的培养器皿在无菌和基质胶不蒸干的条件下，可以在 4℃保存两周。

成骨诱导分化操作规程

所需材料

• 0.25%Trypsin-0.02%EDTA

• 1×PBS

• iCell 骨髓间质干细胞完全培养基

• iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基操作

注：本操作规程以六孔板为例

1. 将 iCell 骨髓间质干细胞置于 37℃，5% CO2 的培养箱中培养。

2. 当细胞融合度达到 80-90%时，用 0.25%Trypsin-0.02%EDTA 进行消化。

3. 将消化下来的骨髓间质干细胞按照 1×105 cells/cm2 的细胞密度接种在事先包被基质胶的六孔板中，每孔加入 2 mL 完全培养基。。

4. 将细胞置于 37℃，5% CO2 的培养箱中进行培养。

5. 当细胞融合度达到 60%-70%时，小心的将孔内完全培养基吸走，向六孔板中加入2 mL iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基。

6. 每隔 3 天换用新鲜的 iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化完全培养基（使用前需预热至 37℃）

7. 诱导 2-4 周后，视细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。

注：为防止成骨细胞脱落，建议成骨过程中出现大量钙结节之后，换液形式变为每两天一次半量换液。

茜素红染色分析

所需材料

• 1×PBS

• 4%中性jia醛溶液

• 茜素红染液

实验步骤

1. 成骨诱导分化结束后，吸走六孔板中的成骨诱导分化完全培养基，用 1×PBS 冲洗

1-2 次。每孔加入 2 mL 4%中性jia醛溶液，固定 30 min。

2. 吸走中性jia醛溶液，用 1×PBS 冲洗 2 次。每孔中加入 1 mL 茜素红染液染 3-5 min。

3. 吸走茜素红染液，用 1×PBS 冲洗 2-3 次。

4. 将培养板置于显

5. 微镜下观察成骨染色效果。

产品稳定性及保存条件

1. 所有产品均需避光保存。

2. 间质干细胞成骨诱导分化基础培养基和茜素红置于 2-8℃保存，保质期为 1 年； 其他因子置于-20℃保存，保质期为 2 年；完全培养基配制好后于 2-8℃保存，保质期为 1 个月。

3. 所有产品请于保质期内使用，超过保质期，不得使用。

4. 为确保产品质量，请避免反复冻融相关产品。

质量控制

iCell 骨髓间质干细胞成骨诱导分化培养基已使用 iCell 大鼠骨髓间质干细胞进行性能测试。

主要的鉴定标准包括：

Ø 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）

Ø pH 测试

Ø 渗透压检测

Ø 内毒素检测

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