酵母双杂交检测实验技术服务

                        蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究反式作用因子之间的相互作用对真核基因转录调控影响的实验，同以往研究蛋白质-蛋白质之间相互作用的实验手段相比，酵母双杂交系统具有其独特优势。
1、融合体蛋白之间的相互作用是在真核酵母细胞内进行，蛋白质保持天然的折叠状态，这是其他离体生化检验方法所缺乏的，它所证实的蛋白质间相互作用将更接近于体内的真实水平。
2、 双杂交系统的敏感度非常高，蛋白质之间结合常数低至1mmol/L时都可以被侦测。
3、 在筛选cDNA 文库时，双杂交系统能够简捷地得到编码相互作用蛋白的基因序列，它只需构建质粒而不必准备抗体或纯化蛋白，省略了其它体外检测蛋白之间相互作用方法所必须的蛋白抽提、纯化等繁琐步骤。



酵母双杂交实验原理
以Gal4 系统为例，BD和AD 分别由Gal4 蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4 系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA 结合结构域与靶蛋白即"诱饵"相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的BD 可以与GAL4 上游活化序列（GAL UAS）结合但不能引起转录，单独的AD 则不能与GAL UAS 结合；只有当BD 与 AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时，BD 与AD 才能与 GAL UAS结合并且引起报道基因的转录，从而激活下游报告基因，通过这一系列实验来验证两个蛋白之间的相互作用。

酵母单/双杂交检测服务项目列表

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