乙酰化相关检测

                       HAT活性检测实验
简介：
组蛋白是与基因组DNA共同构成染色质的基本物质，染色体DNA双螺旋分子一组蛋白为骨架，缠绕结合构成染色质。染色质缠绕进门程度的改变，是相关基因表达开放与关闭的调节机制之一。组蛋白乙酰化水平的调控是这种调节机制的一个基础。组蛋白乙酰化水平由组蛋白乙酰转移酶(Histone Acetyltransferase, HAT)和组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylase, HDAC)共同决定并维持其动态平衡，从而控制染色质的结构和调节基因的表达。研究表明肿瘤的发病与组蛋白的乙酰化和去乙酰化这对平衡的紊乱有着密切关系。HAT可以增加组蛋白的乙酰化中和组蛋白电荷，使RNA合成酶、转录因子、调节因子复合物接近DNA，使基因更容易表达。HAT活性异常可以导致从神经性病变到癌症等多种疾病的产生。
 
实验流程：
1. 细胞核抽提物/HAT抽提物制备；
2. 分光光度法/荧光法/试剂盒(选一)检测HAT活性；
3. 绘制拟合率曲线(抑制率/活性)。 
 
相关要求(客户提供)：
1. 如需检测纯化蛋白：需-20度条件下保存和运输，浓度要求： >1μg/μL；
2. 如需分离组织中HAT，将另外收取组织抽提费用；
3. 如选择试剂盒检测，请提供相关试剂盒。
 
最终结果：
原始实验数据；具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家、批号))；原始数据及相关结果分析。

染色质免疫沉淀技术(ChIP) 检测基因组特定区域染色质中组蛋白的乙酰化状态
服务流程：
1. 核小体与DNA交联；
2. 分离染色质，超声切割到平均3个核小体长度；
3. 用抗乙酰化N―末端组蛋白序列的特异抗体进行免疫沉淀；
4. 抽提免疫沉淀染色质中的DNA；
5. PCR扩增特定的DNA序列，从而检测特定基因相关染色质中组蛋白乙酰化的程度。

相关要求(客户提供)：
1. 待检测组蛋白乙酰化位点，相应ChIP级抗体。
2. 研究用细胞或组织

最终结果：
1. 阴性对照结果；
2. 原始实验结果；
3. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家）

免疫共沉淀/Western blot 检测细胞组蛋白乙酰化水平

服务流程：
1. IP级抗乙酰赖氨酸抗体免疫共沉淀细胞总乙酰化蛋白；H3, H4抗体Western blot检测细胞乙酰化水平。
2. 直接用特定乙酰化位点-特异性抗体检测细胞乙酰化水平。
 
相关要求：
客户需提供研究用细胞或组织，各种指标检测相应抗体。
 
最终结果：
1. 阴性对照结果；      
2. 原始实验结果；
3. 具体试验流程(包括：实验步骤；主要仪器及试剂说明(含仪器厂家、型号；试剂厂家）
 

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