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产品简介
慢病毒(Lentivirus)载体是以 HIV-1 (人类免疫缺陷1型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。具有感染谱广泛、可以有效感染分裂期和静止期细胞、长期稳定表达外源基因等优点,因此成为导入外源基因的有力工具。现在慢病毒系统已经被广泛应用到各种细胞系的基因过表达、RNA干扰、microRNA研究以及活体动物实验中。
整体实验流程
(一) 实验流程(1、2、3为并列步骤)
1. 慢病毒过表达质粒载体的构建 设计上下游特异性扩增引物,同时引入酶切位点,采用PCR技术(采用高保真KOD酶,3K内突变率为0%)从模板中(cDNA质粒或者文库)调取目的基因CDS区(coding sequence)连入T载体。将CDS区从T载体上切下,装入慢病毒过表达质粒载体。
2. 慢病毒干扰质粒载体的构建 合成siRNA对应的DNA颈环结构,退火后连入慢病毒干扰质粒载体。
3. miRNA载体构建从 Genomic 中调取基因相应的Mir 前体, 并在调取引物中引入酶切位点。
4. 慢病毒载体的包装与浓缩纯化 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒(两质粒包装系统),三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,转染后6 h 更换为完全培养基,培养48和72h后,分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,病毒上清液通过超离心浓缩病毒。
(二)流程图
提供产品
产品名称
病毒滴度
规格
赠送阴性对照病毒规格
过表达慢病毒
>10^8 PFU/ml
1ml
1ml(>10^8 PFU/ml)
干扰慢病毒
基因转染利器—慢病毒包装,基因转染利器—慢病毒包装
基因转染利器—慢病毒包装信息由上海科维创生物科技有限公司为您提供,如您想了解更多关于基因转染利器—慢病毒包装报价、型号、参数等信息,欢迎来电或留言咨询。
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