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CRISPR/Cas9系统是当今基因编辑领域最热门的明星工具,2013年,Broad研究所的两个研究团队分别在Science杂志同一期上发表了CRISPR文库的相关研究。在此之后,基于CRISPR/Cas9的工具得到了快速发展,CRISPRa,CRISPRi及CRISPR敲除文库已经广泛用于证明新的生物学机制,如耐药性和细胞存活信号。多篇CNS(Cell、Nature、Science)连续报道。利用该技术,研究人员在药物靶标发现、基因功能研究、药物敏感基因研究等领域取得了巨大的成功。
1、HYY现有CRISPR筛选文库
2、全基因组CRISPR文库有什么作用,能应用于哪些方面,相对其他的有什么优势?
以全基因敲除文库为例(GeCKO),GeCKO文库是基于CRISPR-Cas9敲除技术,靶位点覆盖全基因组的敲除库。目前我们所拥有的是人类基因组CRISPR敲除文库,其涵盖了19050个靶基因,每个基因设计了6个靶位点(分为A,B两个子文库,每个子文库各含3个靶位点),并涵盖1864个miRNA,每个miRNA有4个靶位点,同时含有1000个空白对照sgRNA质粒,共由123411个sgRNA靶标质粒组成。可以将GeCKO文库质粒进行病毒包装,利用CRISPR敲除文库病毒转染目的细胞,可以获得该目的细胞的全基因组敲除的细胞库,根据不同的实验目的,采用相应的筛选方式获得存活下来的细胞,通过高通量测序,即可得到相应的富集的sgRNA靶位点,筛选出相应的功能缺失型基因。RNA干扰(RNA interference, RNAi)文库曾被广泛应用于功能缺失型基因筛选。利用RNA干扰鉴定高等生物基因功能的技术虽然已经普及,甚至被应用于高通量、全基因组规模的功能性筛选中,但是由于RNA干扰不能完全抑制基因表达,常常不足以造成稳定的表型变化,从而影响对基因功能的正确判断。另外,RNA干扰经常伴随脱靶现象,其基因回补验证的过程也非常繁琐复杂,使用起来不尽如人意,因此必将逐步被CRISPR敲除文库所取代。
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