CRISPR/Cas9敲除技术的原理是Cas9结合到sgRNA上,sgRNA的引导序列与基因组DNA中的靶标序列结合,Cas9切割靶标序列产生双链断裂,迫使细胞进行紧急修复,通常条件下,细胞偏向于使用非同源末端连接(NHEJ:nonhomologous DNA end joining)的方式对断裂的双链进行修复,从而造成靶位点基因的插入或缺失突变,发生移码突变可以完全敲除目标蛋白。 CRISPR/Cas9基因敲除技术是继TALEN基因敲除技术之后又一大突破,具有操作简便,周期短,敲除效率高,作用靶点多,无基因、细胞及物种限制,目的基因的大小不受限制,不受转录本数量影响等优势,逐渐成为基因敲除的标准操作工具。