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基因组分析产品数据来源:SNP 数据、CNV数据、甲基化数据等(WES/WGS/WGBS/CMA/850K)二、HT-BSP数据分析HT-BSP(BSP高通量测序) vs T-BSP(BSP克隆测序法)
2.1 下机原始数据,经过去除低质量数据之后,采用perl 脚本结合PCR引物5’段barcode 序列将文库信息分离到对应样品。分离样品统计如下:
2.2 甲基化水平分析将测序序列和参考序列比对,挑选出相应CpG 位点的测序碱基类型。如某位置的测序碱基为C,则此位置为甲基化状态,如为T,则此位置为非甲基化状态。通过计算甲基化状态序列/(甲基化状态序列+非甲基化状态序列)得到甲基化比例。若是3:3以上实验设计会添加P值筛选标准。
2.3 CG位点甲基化点状图BSP高通量测序法是检测单基因甲基化的经典方法,原理为用亚硫酸氢钠修饰处理基因组DNA,所有未发生甲基化的胞嘧啶(C)被转化为尿嘧啶(U)而甲基化的胞嘧啶则不变。基因组DNA经亚硫酸盐处理后,设计BSP引物扩增目的片段,此时尿嘧啶(U)全部转化为胸腺嘧啶(T),最后对PCR产物进行测序就可以判断CpG位点是否发生甲基化。BSP点状图是展示甲基化的经典方法,白色的点表示未发生甲基化的CpG位点,实点表示发生甲基化的CpG位点。Demo:
文章案例:研究发现CpG岛的甲基化状态参与miR-608表达的调控。 miR-608启动子区域高甲基化,miR-608低表达促进膀胱癌增殖和细胞周期进展。miR-608是膀胱癌中潜在的肿瘤抑制因子。
参考文献:Zhen Liang et al. MicroRNA-608 inhibits proliferation of bladder cancer via AKT/FOXO3a signaling pathway. Molecular Cancer. 2017.
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