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甲基化敏感扩增多态性,它是在扩增片段长度多态性技术的基础上建立起来的。MSAP技术相对其他测定DNA甲基化程度技术有如下优点:(1)不需知道被测DNA的序列信息,在不同生物上具有通用性,可用于DNA序列背景知识未知的生物。(2)操作相对简便,在AFLP技术体系的基础上不需要太大改进,即可操作。(3)可在全基因组范围检测CCGG位点的胞嘧啶甲基化变化。MSAP技术的局限性在于不能完成非CCGG位点的胞嘧啶甲基化。MSAP的选择扩增产物目前主要通过两种方法进行分离检测,传统的聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)的方法和自动化程度较高的毛细管凝胶电泳(FISH)进行检测。 PAGE方法主要是优点是引物可以是普通引物,价格相对较低,适用于少量样本或者大量样本的引物筛选比较合适,另外还可以对差异条带进行克隆测序,获得差异条带的序列信息。毛细管电泳检测方法的优点是自动化,可以对大量样本进行实验,速度快,后期的条带读取可以依靠软件,降低了人为读取的标准不一。1)MSAP实验路线前期确认阶段:试验样本类型,数量,引物,签订试验合作合同;试验阶段:DNA提取,酶切,预扩增,选择性扩增,电泳检测;若需要克隆,进行目的条带的回收并测序(周期视工作量而定);数据分析:和客户详细沟通,确认分析方案:读取01矩阵;2)目前已经进行的样本类型:树木,草,花卉,昆虫,鱼类,虾类等3)客户须知:本公司需要签订技术服务合作合同;本公司再试验结束后,如没要求,试验样本将统一销毁;本公司不接受具有致病性和潜在危险的原始样本,此类样本请您提供样本DNA。
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