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细胞瞬时转染
一、服务介绍 细胞转染的基本原理将外源DNA克隆到载体上后导入细胞,借助宿主细胞表达载体上的目的片段,从而使目的基因在细胞中发挥功能。目前转染方法有多种,如脂质体转染法、磷酸钙-DNA共沉淀法、电穿孔转染法、腺病毒感染等。 常规转染技术可分为两大类,一类是瞬时转染,另一类是稳定转染,前者转染的外源DNA不整合到宿主染色体中,通常表达只持续几天,一般在转染24-72小时后检测。后者转染的外源DNA将整合到宿主染色体中,可持续性表达,一般可用于稳定细胞株的构建。 本公司使用商用化的lipofectamine2000作为转染试剂,所有实验步骤及试剂按照厂家建议的用量。实验中使用转染试剂在常温条件下同待转染质粒/RNA在培养基中组装成复合体,按照一定的比例将上述装配产物加入到对数生长期的细胞中。待培养一段时间后,可结合下游实验检测项目。二、服务内容 1. 载体构建(可选),RNAi合成(视转染情况而定); 2. 将细胞按照1-3*105接种到6孔板中,加入2-4ml的完全培养基,混匀放置在二氧化碳培养箱中37OC过夜;3.无菌状态下配制如下液体:a. 用100ul的Opti-MEM 培养基稀释2ug的待转染的质粒;b. 用100ul的Opti-MEM 培养基稀释25ul的 lipofectamine转染试剂;4.将a,b液混合并摇匀,室温下放置30min左右;5.细胞培养至80%单层左右,用Opti-MEM培养基洗涤细胞两次,每孔加入1m Opti-MEM培养基,并将混合后的ab溶液逐滴加入到每孔,按十字方向轻摇混匀,二氧化碳培养箱中培养24小时;6.4-6小时后将转染液吸出,换为完全培养基继续培养,培养3-4天后检测蛋白表达量。
pEGFP转染293T细胞
三、服务说明 1. 客户提供:受试细胞,自行构建的质粒(需提供质粒相关信息); 2. 构建质粒(可选,须另付费),合成siRNA等(可选,须另付费);3. 实验周期:1-2个月;4.若另有疑问欢迎向本公司咨询,我们将竭诚为您服务。 四、质量承诺 1. 权威的细胞瞬时转染实验鉴定报告;2. 详细的实验步骤;3. 真实的原始实验数据。
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