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长链非编码RNA(Long noncoding RNA,IncRNA)指的是长度超过200nt的RNA分子。它们不编码蛋白,位于细胞核或胞质内,具有保守的二级结构,可与蛋白质、DNA和RNA相互作用,通过多种机制(如基因印记、染色质重塑、细胞周期调控、剪接调控、mRNA降解和翻译调控等)在多种层面上(如表观遗传学、转录调控及转录后调控等)调控基因的表达水平。IncRNA参与多种生物学过程的调控,在多种生命活动中发挥重要作用,该领域的关注度也日益增高,已成为继信使RNA(mRNA) 、小RNA(microRNA、 siRNA等)之后功能基因组学最火热的研究领域。 ◎达晖现提供下述IncRNA 研究服务确定IncRNA表达利用RT-PCR或者q RT-PCR 或者IncRNA在不同组织中的表达水平。探究IncRNA 特点●通过QD-FISH原位杂交技术定位;或者通过细胞核质分离试剂盒得到RNA,QRT-PCR检测其分布;●全长序列试验方法:通过RACE得到IncRNA完整的全长序列。IncRNA的功能研究IncRNA较长,承载的信息量多,更容易形成高级结构,其功能具有多样化和特异性强的特点。类似于miRNA,探讨IncRNA功能可用gain/loss lf function策略,过表达或沉默IncRNA后观察表型。即研究IncRNA功能获得后或者功能缺失后对细胞增殖、凋亡、侵袭、转移与克隆形成,以及病毒的转录复制等的影响。●功能获得性研究构建IncRNA过表达质粒或者慢病毒、腺病毒包装载体。●功能缺失性研究SiRNA, shRNA、反应核酸。④检测结合蛋白质利用体外转录,RNA pull down,MS等技术手段检测与RNA绑定的蛋白质。⑤预测并验证作用的mi RNA利用软件预测mi RNA在IncRNA的作用靶点,并进行验证。⑥表达调控将IncRNA表达与其它领域相结合,解释其调控机理。●DNA甲基化和乙酰化;可通过检测相应基因甲基化、乙酰化差异与IncRNA结合分析。●转录因子:研究IncRNA与转录因子的调控报价:
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